解放军医学院学报杂志

解放军医学院学报杂志2022年第4期

• 慢性阻塞性肺疾病患者肺功能MMEF/FVC与FeNO、血清标志物的相关性及意义

  朱能洋, 韩志海, 陈旭昕, 张燕, 赖莉芬, 丁静, 刘方, 孟激光

    背景  既往研究发现最大中期呼气流量(maximal mid-expiratory flow，MMEF)与用力肺活量(forced vital capacity，FVC)的比值可反映慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)患者小气道功能，而在COPD患者中MMEF/FVC、呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide，FeNO)和血清标志物的相关性及意义尚不清楚。  目的  探索COPD患者MMEF/FVC、FeNO和血清标志物之间的相关性及意义。  方法  纳入2020年1月- 2021年1月解放军总医院第六医学中心149例患者，其中COPD组58例，COPD风险组44例，健康对照组47例。比较三组受试者MMEF/FVC、FeNO、白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、肺泡表面蛋白D(surface protein D，SP-D)的表达水平及之间的相关性，并分析MMEF/FVC、FeNO联合不同血清标志物在COPD诊断中的预测价值。  结果  MMEF/FVC值在COPD组、COPD风险组、健康对照组依次升高，差异有统计学意义(P均＜0.05)；而FeNO水平依次降低，差异有统计学意义(P均＜0.05)；COPD组血清IL-6、SP-D水平高于COPD风险组和健康对照组(P均＜0.05)；三组患者中FeNO、血清标志物(IL-6、CRP、SP-D)与MMEF/FVC均低度负相关(FeNO：r=-0.289，P＜0.001；IL-6：r=-0.296，P＜0.001；CRP：r=-0.255，P=0.002；SP-D：r=-0.177，P=0.031)。血清标志物(IL-6、CRP)与FeNO呈中度正相关(分别为IL-6：r=0.323，P＜0.001；CRP：r=0.434，P＜0.001)。MMEF/FVC联合FeNO与血清标志物诊断COPD风险的受试者工作曲线下面积为0.696，95% CI为0.588～0.804。  结论  MMEF/FVC、FeNO和血清标志物之间存在一定的相关性，可作为反映COPD患者疾病严重程度的指标，联合筛查的方式可提高COPD高风险人群的识别能力。

• 稳定期COPD患者呼出气一氧化氮与外周血嗜酸性粒细胞水平的相关性分析

  张彩云, 韩志海, 孟激光, 赖莉芬, 刘方, 李泳群

    背景  血嗜酸性粒细胞(eosinophils，EOS)计数已成为慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)患者应用吸入糖皮质激素(inhaled corticosteroids，ICS)治疗的指征，但呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide，FeNO)在稳定期COPD患者诊断治疗中的应用价值仍不清楚。  目的  观察不同特征的稳定期COPD患者外周血EOS与FeNO的相关性，探讨FeNO在稳定期COPD患者中的应用价值及局限性。  方法  回顾性纳入2017年3月- 2020年3月在我中心接受FeNO和外周血嗜酸性粒细胞计数检测的稳定期COPD患者和哮喘患者，分别对两组患者FeNO与血EOS计数的相关性进行统计分析。对FeNO值升高的危险因素进行二元logistic回归分析。根据气道阻塞程度(FEV1pred%)、过度充气程度(RVpred%：150%及RVpred%：200%)进一步将COPD患者分为FEV1pred%＞50%组及FEV1pred%≤50%组、RVpred%＞150组及RVpred%≤150组、RVpred%＞200组及RVpred%≤200组分别进行FeNO和血嗜酸性粒细胞相关性分析。分别对哮喘组及COPD组血嗜酸性粒细胞预测FeNO值升高的鉴别效能进行ROC分析。  结果  共纳入COPD患者113例，其中男性90例，女性23例，平均年龄(69.04±9.59)岁；支气管哮喘患者43例，其中男性31例，女性12例，平均年龄(68.37±9.45)岁。哮喘组FeNO与血EOS计数呈中度相关(r=0.439，P＜0.001)；而COPD组FeNO水平与血EOS无相关性(r=0.104，P=0.272)。二元logistic回归分析发现吸烟史为COPD组FeNO升高的危险因素，RVpred%为FeNO升高的保护性因素。对COPD患者进行亚组分析，发现FEV1pred%≤50%组外周血EOS与FeNO呈正相关(r=0.370，P=0.020)。其余亚组血EOS与FeNO均无相关性(P＞0.05)。ROC分析发现COPD组中血嗜酸性粒细胞对FeNO值几乎无鉴别效能；FEV1pred%＜50% COPD组血嗜酸性粒细胞对FeNO值有一定的鉴别效能，AUC为0.688(95% CI：0.444 ~ 0.931)，敏感度为0.56，特异性为0.90。哮喘组血嗜酸性粒细胞对FeNO值有较好的鉴别效能，AUC为0.869(95% CI：0.721 ~ 1.018)，敏感度为0.83，特异性为0.90。  结论  稳定期COPD患者FeNO与血EOS的相关性与哮喘患者不同，其FeNO水平与血EOS无相关性，但FEV1pred%≤50%的患者FeNO与血EOS存在一定的正相关。稳定期COPD患者FeNO不能代替血EOS用于评估ICS使用，FEV1pred%＜50% COPD组FeNO值在一定程度上可代替血EOS用于评估是否使用ICS治疗，而哮喘患者FeNO值可代替血EOS用于评估气道嗜酸性炎症。

• 宫颈微生态对高级别宫颈上皮内瘤变患者锥切术后转归的影响分析

  王雪琪, 罗世城, 马莹, 李莉, 李立安, 李亚里, 翟青枝, 孟元光

    背景  高级别宫颈上皮内瘤变(high-grade squamous intraepithelial lesions，HSIL)患者行宫颈锥切术，术后持续高危人乳头瘤病毒(high risk-human papilloma virus，HR-HPV)感染是进展为宫颈癌的主要因素，但导致持续感染的原因不详，需要进一步明确。  目的  比较HSIL锥切术前宫颈微生态与术后转归的相关性，寻找导致术后持续感染的原因。  方法  选取解放军总医院第一医学中心2020年9月- 2021年9月因HSIL行宫颈锥切术的病例，术前采集宫颈分泌物，根据术后3个月复查HR-HPV结果分为HR-HPV转阴组和HR-HPV阳性组，同时选取24例健康者作为对照组。进行核酸提取，针对16S rRNA的V3 + V4区域进行PCR扩增和测序，对有效数据进行分析，主要采用α、β多样性分析比较术前宫颈微生态差异。  结果  通过倾向性匹配每组纳入24例，共72例。总体上宫颈微生物在属水平上以乳杆菌种为主。α多样性显示阳性组菌群多样性高于转阴组(P=0.039)，转阴组宫颈群落多样性高于对照组(P=0.037)，β多样性分析术后阳性组与转阴组较为相似，与对照组差异较大，优势菌群均为厚壁菌门(Firmcutes)。MetaStat综合分析三组数据，其中差异有统计学意义的菌属中丰度最高的为链球菌属(P=0.044)。  结论  三组宫颈群落属水平均以乳杆菌属为优势菌；消化链球菌可能是影响锥切术后HR-HPV转归的重要因素；HSIL疾病本身及术后转归均与宫颈微生态密切相关。

• 重度卵巢过度刺激综合征患者高凝趋势及预后分析

  王璐, 穆莎, 左世栋, 杨怡卓, 王辉, 赵春草, 李晓晗, 焦明月, 彭红梅

    背景  卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstimulation syndrome，OHSS)是在控制性超促排卵过程中使用促性腺激素产生的过度反应，是人工辅助生殖(assisted reproductive technology，ART)过程中最严重的并发症，其高凝问题特点和治疗还缺乏深入探讨。  目的  探讨凝血指标在重度OHSS患者中的变化，分析高凝状态病因及治疗预后，以指导临床更好地预防血栓形成。  方法  回顾性分析2017 - 2021年解放军总医院第一医学中心妇产科生殖中心行ART助孕治疗后发生重度OHSS入院接受干预患者的临床资料，分析其凝血酶时间(thrombin time，TT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)、凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、国际标准化比值(international standard ratio，INR)、凝血酶原活动度(prothrombin time activity，PTA)、血浆纤维蛋白原测定(fibrinogen，Fib)变化程度，以及红细胞比容(hematocrit，HCT)、白细胞计数(white blood cell，WBC)、中性粒细胞比例(neutrophil，NEUT%)、血小板计数(platelet，PLT)、血清白蛋白(albumin，ALB)、血清Na+、血清K+、尿量和胸腹腔引流液变化趋势及治疗预后。  结果  共收集29例重度OHSS患者，平均年龄为(31.03±4.98)岁。凝血功能相关指标与发病前相比，TT略下降，PT略上升，Fib明显升高，差异有统计学意义(P均＜0.05)，而APTT、血浆凝血酶原活动度、INR等变化不明显；其他指标中，HCT、WBC明显升高，ALB及血清Na+明显降低(P均＜0.05)；Pearson相关性分析发现取卵数与PT延长呈正相关(r=0.380，P=0.042)，与腹腔引流液转归时间呈正相关(r=0.468，P=0.010)。29例患者均经腹腔穿刺引流、补液、抗凝等对症支持治疗后出院。  结论  重度OHSS患者血液呈高凝状态，主要归因于血容量丢失导致的血液浓缩，且病情严重程度与取卵个数呈正相关，因此针对这类患者，核心诊疗手段应为科学的补液治疗，必要时辅以肝素、降纤酶等抗凝药物对症处理。

• 超声药物导入联合体外冲击波治疗足跟痛的疗效观察

  耿雨涵, 黄丽萍, 张晓倓, 张攻孜, 李军, 丘晓娟, 张立宁, 谢惠敏

    背景  足跟痛可导致足踝功能障碍。体外冲击波治疗可在1 ~ 2 d内恢复日常生活，但冲击波疗法也存在疗效持续时间短的局限。超声药物导入是近年来一种较为新颖的给药方法，但目前尚未见将这种方法应用于足跟痛的治疗。  目的  探究超声药物导入联合体外冲击波对于治疗足跟痛的疗效。  方法  选取于2019年9月- 2021年9月就诊解放军总医院第一医学中心康复医学科的足跟痛患者60例，随机分为治疗组和对照组，每组30例，两组均先进行体外冲击波治疗，1次/周。治疗组在冲击波治疗后加用超声药物(双氯芬酸二乙胺乳胶剂)导入法治疗，时间为15 min，5次/周，共2周。对照组在体外冲击波后加用伪刺激超声，方法与治疗组相同。于治疗前、治疗1周和治疗2周后采用视觉模拟量表(visual analogue scale，VAS)和美国足踝外科协会后足评分量表(American Orthopaedic Foot & Ankle Society，AOFAS)评估患者疼痛程度和足踝功能。  结果  两组基线资料比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。治疗后，两组VAS评分较治疗前均显著降低，AOFAS评分均显著提高(P均＜0.05)；治疗组间相比，治疗1周后两组VAS和AOFAS评分差异无统计学意义，治疗2周后治疗组VAS分数显著低于对照组(3.36±1.00 vs 4.29±1.06)，AOFAS分数显著高于对照组(80.22±8.73 vs 71.44±7.58)(P均＜0.05)。  结论  超声药物导入联合体外冲击波治疗及单纯冲击波治疗均能有效降低足跟痛患者疼痛并改善足踝功能，但联合治疗疗效更佳，推荐治疗周期至少2周。

• 基于炎性标志物构建ICU脓毒症患者早期预测模型

  李晓明, 刘超, 王晓莉, 毛智, 伊宏煜, 周飞虎

    背景  脓毒症是由于机体对感染的反应失调而出现的以器官功能障碍为主要特征的临床综合征，是重症监护病房(intensive care unit，ICU)患者的主要死亡原因之一。早期识别潜在的脓毒症患者，采取积极的干预措施，可降低脓毒症的发生率、改善脓毒症患者的预后。  目的  基于炎性标志物构建预测ICU患者发生脓毒症的列线图，帮助临床医师早期识别潜在的脓毒症患者。  方法  回顾性纳入2017年8月- 2020年12月入住解放军总医院第一医学中心ICU的患者，将符合纳入标准的患者以7∶3的比例随机分为训练集和验证集。根据logistic回归分析结果，利用R软件的“rms”软件包构建列线图，通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic，ROC)下面积(area under the ROC curve，AUC)、敏感度、特异性来评估列线图的预测性能；通过1 000次自抽样的方法构建列线图的校准曲线，评估列线图的校准度。将验证集中患者相应数据纳入模型中，对模型的性能进行验证。并与单一炎性标志物和序贯器官衰竭评分(sequential organ failure assessment，SOFA)的预测性能进行对比。  结果  2 074例患者纳入研究，1 451例被随机分配到了训练集，623例被随机分配到了验证集。以logistic回归筛选的5个炎性标志物(白细胞计数、C反应蛋白、白细胞介素-6、中性粒细胞-淋巴细胞比值、降钙素原)绘制列线图，预测ICU患者发生脓毒症的AUC值为0.854(95% CI：0.835 ~ 0.872)，敏感度为0.820，特异性为0.737，预测性能优于单一炎性标志物和SOFA评分(P均<0.05)。  结论  基于炎性标志物构建的列线图可用于ICU脓毒症患者的早期预测，帮助临床医师早期识别潜在的脓毒症患者。

• 胃癌患者完全3D腹腔镜与腹腔镜辅助全胃切除、食管空肠Roux-en-Y吻合术围术期疗效比较

  刘帛岩, 高子贺, 林海冠, 李松岩

    背景  腹腔镜手术已获得普遍应用，但一部分研究者仍对完全腹腔镜技术持观望态度。  目的  比较完全腹腔镜与腹腔镜辅助两种手术方式在根治性全胃切除、食管空肠Roux-en-Y吻合术的围术期疗效。  方法  回顾性分析解放军总医院第一医学中心普通外科2018年1月- 2020年12月采用根治性全胃切除、Roux-en-Y吻合术治疗的155例胃癌患者临床资料，年龄52 ~72岁，男性86例，女性69例，其中87例行完全腹腔镜手术(T组)，68行腹腔镜辅助手术(L组)。比较两组手术时间、术中出血量、手术切口长度、术后拔除胃管时间、术后排气时间、总住院时间、吻合口瘘发生率、吻合口出血发生率、十二指肠残端瘘发生率、术后切缘阳性率、淋巴结检出数及阳性率等。  结果  两组患者年龄、性别、体质量指数、肿瘤TNM分期等临床基线资料差异无统计学意义(P均＞0.05)；完全腹腔镜手术组的术中出血量(58.20±38.80) mL vs (98.13±47.87) mL，P＜0.05、手术切口长度(4.03±1.03) cm vs. (10.99±1.01) cm，P＜0.05、术后拔除胃管时间(13.43±1.57) h vs (63.01±21.29) h，P＜0.05、术后排气时间(40.08±19.98) h vs (64.58±28.08) h，P＜0.05、总住院时间(7.55±1.55) d vs (8.97±2.03) d，P＜0.05均优于腹腔镜辅助手术组；而两组在手术时间、淋巴结阳性检出率和术后近期并发症发生情况等方面的差异无统计学意义(P均＞0.05)。  结论  完全3D腹腔镜根治性全胃切除、食管空肠Roux-en-Y吻合术可以达到更好的临床效果，与腹腔镜辅助手术方法相比有手术创伤小、恢复快的特点。

• 超声显像技术观察小儿颈内静脉与颈总动脉解剖关系的临床研究

  黄应思, 刘洋, 徐海平, 杨利, 冯龙, 袁维秀

    背景  小儿头大、颈短、胸锁乳突肌显露不明显，传统盲穿法失败概率高，超声显像技术可无创显露目标血管图像，为小儿颈内静脉穿刺提供参考。  目的  通过超声显像技术观察小儿右侧颈内静脉与颈总动脉不同平面的解剖结构关系。  方法  2020年4 - 7月选取广州市妇女儿童医疗中心及解放军总医院海南医院4个月~ 11岁择期手术的患儿125例，男患儿82例，女患儿43例。将患儿分为婴儿组、幼儿组、学龄前儿童组和学龄儿童组，扫描每组患儿右侧甲状软骨上缘水平(upper border of the thyroid cartilage，TC)、环状软骨水平(cricoid cartilage，CC)和第二气管环水平(second tracheal ring，ST) 3个横截面。分别测量不同年龄组患儿不同平面的颈内静脉与颈总动脉的横径、前后径、横截面积、两者的重叠率、颈内静脉与颈总动脉夹角，记录两者之间的相互关系及变异情况。  结果  幼儿组、学龄前儿童组，重叠距离：第二气管环水平＞环状软骨水平＞甲状软骨上缘，两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；重叠率：第二气管环水平＞环状软骨水平＞甲状软骨上缘水平，两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05)；婴儿组、学龄儿童组，不同解剖平面重叠情况与颈内静脉变异情况比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)；四组不同解剖平面颈内静脉与颈总动脉相互关系比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)。  结论  超声显像技术提示1 ~ 6岁儿童在甲状软骨上缘水平动静脉重叠率及重叠距离最低，可优先选择该处作为临床颈内静脉穿刺点。

• 基于人体成分数据建立预测老年人衰弱的机器学习模型

  刘金炜, 徐率轩, 王芳, 马爽, 曹梦宇, 陈超, 徐创, 张倪惠, 康靖汶, 陈蔚, 彭楠

    背景  目前衰弱评估量表众多，多数指标难以客观定量。人体成分分析仪能快速获得与衰弱评估相关的定量数据，在大数据的挖掘与分析中机器学习具有一定的优势。  目的  建立基于人体成分数据的机器学习模型，评价其诊断预测衰弱的价值。  方法  2021年4 - 6月收集北京10个社区65岁以上老年人体检数据，以Fried衰弱表型量表作为衰弱诊断的金标准，筛选相关指标，建立随机森林、支持向量机、logistic回归和XGBoost模型，运用ROC曲线、敏感度和特异性等评价模型的预测效能。  结果  共纳入558例数据进行建模分析，其中衰弱前期122例，非衰弱436例。随机森林算法筛出年龄、50 kHz全身相位角、骨骼肌质量、体脂百分比等10个重要性靠前的特征，并据此建立四个预测模型。Logistic回归模型的整体预测效能最高，ROC曲线下面积达到0.872，敏感度和特异性分别为78.38%和80.15%，预测准确率为79.76%。另外三种模型的整体效能差异不大，预测准确率均超过75%。  结论  基于人体成分数据建立的logistic回归模型在预测老年人衰弱的效能上高于其他机器学习模型，且预测准确率较高，可用于衰弱的早期临床诊断。

• 社区老年女性跌倒恐惧现状及关联因素分析

  毛亚詹, 苏清清, 宋咪, 皮红英

    背景  跌倒恐惧(fear of falling，FOF)在老年人群中发生率高，但国内缺乏针对社区老年女性FOF现状及相关因素分析的资料。  目的  调查社区老年女性FOF现状并分析关联因素，丰富社区老年女性FOF相关资料，为制定个性化的社区跌倒防控干预措施提供依据。  方法  2021年6 - 9月选取北京市石景山区3个老年活动中心的社区老年女性278例，采用现场问卷调查采集研究对象的人口学资料、锻炼情况、睡眠情况、是否使用助行设备、是否着急上厕所、自我感觉走路不稳、患病种类、长期用药、过去1年跌倒史、FOF、焦虑和抑郁情绪等资料并进行分析。  结果  社区老年女性FOF发生率为53.2%，其中有跌倒史的社区老年女性FOF发生率为69.6%。Logistic回归分析显示独居(OR=2.344，95% CI：1.114 ~ 4.931)、缺乏锻炼(OR=1.983，95% CI：1.020 ~ 3.856)、使用助行设备(OR=2.640，95% CI：1.086 ~ 6.419)、着急上厕所(OR=3.275，95% CI：1.509 ~ 7.109)、走路不稳(OR=3.402，95% CI：1.799 ~ 6.432)和抑郁(OR=2.129，95% CI：1.129 ~ 4.016)与社区老年女性发生FOF独立关联(P ＜ 0.001)。  结论  社区老年女性FOF发生率高，且有跌倒史的社区老年女性FOF发生率更高，独居、缺乏锻炼、使用助行设备、着急上厕所、走路不稳和抑郁的社区老年女性更容易发生FOF，在社区老年人跌倒防控中应注重此类人群的筛查和评估，并实施针对性的预防措施。

• 糖尿病患者周围神经病变的关联因素分析

  宋玲, 孟俊华, 王玉玲

    背景  糖尿病周围神经病变是糖尿病常见的并发症之一，在一定程度上表现为周围神经功能障碍，影响患者的生活质量。  目的  通过对糖尿病患者的调查，分析糖尿病周围神经病变发生的影响因素并提出相应护理对策。  方法  采用问卷调查法，于2021年2 - 5月选取北京市某三甲医院内分泌科住院的糖尿病患者进行问卷调查，主要收集患者基本信息、生活习惯及疾病状况等资料。  结果  200例糖尿病患者参与本研究，男性139例(70%)，女性61例(30%)，平均年龄(70.07±7.94)岁，诊断为糖尿病周围神经病变81例(40.5%)，出现相关症状141例(70.5%)；糖尿病周围神经病变相关症状中发生率最高的是手脚凉(77例，39.5%)和麻木(66例，33.8%)。单因素分析显示吸烟史、饮酒史、饮食情况、锻炼习惯、工作或生活压力、病程、家族史、体检频率、是否合并其他慢性病等与糖尿病周围神经病变有关(P均＜0.05)；logistic回归分析结果显示有吸烟史(OR=2.075，95% CI：1.257 ~ 3.426)、经常食用油炸或加工食品(OR=3.518，95% CI：1.878 ~ 6.592)及出现其他糖尿病并发症(OR=2.285，95% CI：1.442 ~ 3.620)与糖尿病周围神经病变独立关联(P＜0.05)。  结论  生活方式与糖尿病周围神经病变息息相关，有吸烟史、经常食用油炸或加工食品、已经出现其他糖尿病并发症的患者更容易发生糖尿病周围神经病变，通过早期识别和干预可降低糖尿病周围神经病变的发生率，提高患者的生活质量。

• GY66阴道微生态形态学全自动检测仪临床应用评价

  翟青枝, 李立安, 王雪琪, 范一帆, 于东渤, 付玉荣, 李江华, 姜淑芳

    背景  阴道微生物形态学检测是阴道感染性疾病的主要检测方法，以人工镜检为主，耗时较长且主观偏倚明显。基于深度学习的全自动阴道微生态检测仪可有效解决现有问题，但投入使用前需要严谨的对照试验进行验证。  目的  分析GY66形态学全自动检测仪在阴道微生态检测中的有效性。  方法  收集2020年12月1日- 2021年7月31日解放军总医院第一医学中心妇产科门诊患者的阴道分泌物样本303例，分别采用全自动GY66阴道微生态检测仪与革兰染色人工镜检进行滴虫、霉菌、线索细胞及清洁度比较。以人工镜检结果为金标准，评价全自动GY66检测仪阴道微生态有形成分检测的性能。  结果  全自动GY66检测仪与人工镜检的霉菌、线索细胞、滴虫总体检出率差异无统计学意义(P＞0.05)。全自动GY66检测仪的霉菌、滴虫、线索细胞和清洁度检出的总符合率分别为98.68%、99.67%、99.67%和97.69%。全自动GY66检测仪与人工镜检霉菌、线索细胞、滴虫和清洁度的检测结果一致性程度强(Kappa值分别为0.961、0.981、0.939和0.950)，差异无统计学意义。抗干扰能力及交叉污染试验中高浓度阳性样本均不会影响下一个空白标本的结果。抽检3份样本各做3次GY66仪器镜检，重复性检测结果一致。  结论  GY66全自动阴道微生态检测仪进行阴道分泌物检查具有良好的有效性，可为临床提供可靠准确的镜检结果。

• 单中心视神经萎缩患者突变基因和临床表型多样性研究

  徐歆桐, 白文浩, 孙明明, 陈希赟, 徐全刚, 魏世辉, 周欢粉

    背景  遗传性视神经病变(inherited optic neuropathy，ION)常被归类于不明原因的视神经萎缩，基因检测技术有助于明确视神经萎缩的病因。  目的  分析单中心视神经萎缩患者突变基因和临床表型的多样性，为指导ION诊断和治疗提供理论基础。  方法  纳入2017年1月1日- 2021年8月31日解放军总医院眼科诊断为视神经萎缩的患者，对患者本人及部分患者家属进行遗传分子检测。分析视神经萎缩相关的致病突变基因和疾病临床表型。   结果  1) 479例视神经萎缩患者，260例明确诊断为ION，基因突变阳性检出率为54.3%(260/479)。ION患者中，80.3%(209/260)检出28种线粒体基因致病突变，19.7%(51/260)检测出15种核基因突变。2)线粒体基因突变患者的主要诊断为Leber遗传性视神经病变(97.6%，204/209)，这些患者比较年轻(20.79±11.44)岁，多数为男性(84.8%，173/204)，近1/3(32.3%，66/204)有家族史，76.5%(156/204)携带常见突变位点，17.6%(36/204)携带罕见突变位点，5.9%(12/204)患者同时携带两个突变位点；线粒体基因突变患者中还有3例诊断为Leigh综合征，与m.13513G ＞ A突变相关；1例为MELAS综合征，与m.12264C ＞ T相关；1例MERRF综合征，与m.13042G ＞ A相关。3) 51例核基因突变患者中，24例检出与显性遗传性神经萎缩相关的OPA1基因，6例检出相关的OPA3基因突变。24例OPA1基因突变患者中，17例为男性，平均年龄(20.78 ± 17.00)岁，5例有家族史。与显性遗传性神经萎缩无关的核基因突变患者中，5 例检出与Wolfram综合征相关的WFS1突变，3例检出与慢性进行性眼外肌麻痹相关的RRM2B突变，13例合并其他少见视神经萎缩相关的突变基因。  结论  视神经萎缩患者突变基因和临床表型多样。Leber遗传性视神经病变和显性遗传性视神经萎缩是引起ION的主要类型，临床需重视Leber遗传性视神经病变罕见位点检测，关注除OPA1和OPA3之外的其他核基因突变及临床表型，有助于提高遗传性视神经病变的确诊率。

• 牙龈间充质干细胞来源外泌体对成骨样细胞MC3T3-E1体外增殖和成骨分化的影响

  王思拓, 时权, 杨烁, 刘紫微, 邹蓉芳, 徐娟

    背景  牙龈间充质干细胞(gingival mesenchymal stem cells，GMSCs)来源外泌体具有与GMSCs相似的生物学功能，在组织工程领域具有良好的应用前景，但目前缺乏其在骨再生中应用的研究报道。  目的  探讨GMSCs来源外泌体对成骨样细胞MC3T3-E1体外增殖和成骨分化的影响。  方法  体外培养GMSCs，超速离心法提取GMSCs来源外泌体。共聚焦显微镜下观察MC3T3-E1细胞对外泌体的内化摄取。CCK-8法和划痕实验分别检测不同浓度外泌体作用下MC3T3-E1细胞增殖和迁移变化情况。外泌体作用于MC3T3-E1细胞后，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)染色检测ALP活性，茜素红染色及定量实验检测钙结节形成状况；RT-qPCR法检测成骨相关基因ALP、COL1A1、RUNX2的mRNA表达水平。  结果  提取的GMSCs来源外泌体呈现类圆形膜状结构，大小在100 nm左右，表达CD63和Tsg101。外泌体能被MC3T3-E1摄取。GMSCs来源外泌体能够促进MC3T3-E1细胞的增殖和迁移(P＜0.05)，且呈剂量依赖性；外泌体作用下，MC3T3-E1细胞ALP活性增加(P＜0.05)，钙结节形成增多(P＜0.05)，成骨相关基因ALP、COL1A1、RUNX2的mRNA表达水平明显上调(P＜0.05)。  结论  GMSCs来源外泌体具有增强MC3T3-E1增殖及成骨分化的作用，这为GMSCs来源外泌体应用于骨再生治疗奠定基础。

• 地舒单抗对人脐带间充质干细胞增殖及成骨分化的作用研究

  刘修志, 孟昊业, 赵金娟, 王鹏, 林万程, 王恺, 管延军, 张健, 许文静, 彭江

    背景  地舒单抗是一种RANKL抑制剂，具有抑制破骨细胞的作用。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSCs)具有成骨分化的能力。二者联合能否用于治疗股骨头坏死尚无定论。  目的  研究地舒单抗对hUC-MSCs增殖及成骨分化的作用。  方法  培养hUC-MSCs，使用生长状态良好的第3代hUC-MSCs进行实验。以含不同浓度地舒单抗(0.6 mg/mL、0.06 mg/mL、0.006 mg/mL)的hUC-MSCs成骨分化诱导培养基干预细胞作为实验组，以不含地舒单抗的hUC-MSCs成骨分化诱导培养基干预细胞作为对照组。使用CCK-8法检测不同组细胞的增殖活性；茜素红染色和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)染色分别检测各组细胞的成骨分化能力；实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞的ALP、锌指结构转录因子Osterix(OSX)、Ⅰ型胶原酶(type Ⅰ collagenase，COL-Ⅰ)、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2，RUNX-2)的mRNA表达量。  结果  通过流式细胞技术鉴定，hUC-MSCs可表达干细胞表面标志蛋白，且hUC-MSCs具有三系分化能力；与对照组相比，不同浓度地舒单抗(0.6 mg/mL、0.06 mg/mL、0.006 mg/mL)对hUC-MSCs具有促进增殖的作用，结果有统计学差异(P＜0.05)。当地舒单抗的浓度为0.006 mg/mL时，ALP/OSX/COL-Ⅰ/RUNX-2的表达量高于对照组(P＜0.05)；0.006 mg/mL地舒单抗处理的hUC-MSCs成骨分化能力较对照组增强(P＜0.05)，随着浓度的增加，hUC-MSCs的成骨分化能力降低，低于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)。  结论  当地舒单抗的浓度为0.006 mg/mL时，能促进hUC-MSCs的增殖及成骨分化，高浓度(0.6 mg/mL、0.06 mg/mL)的地舒单抗抑制hUC-MSCs的成骨分化。

• 功能性腹壁封闭敷料的制备及其性能测试

  牛泽浩, 王欣, 丁姗姗, 汪滨, 许育健, 李彦, 陈犹白, 雷永红, 郭希民, 韩岩

    背景  腹部开放性创伤是一种常见战创伤，尽快封闭腹腔并保护腹腔脏器对提高伤病员救治率具有重要意义。  目的  研发一种新型腹壁闭合敷料，使其能够满足腹壁开放性损伤救治过程中快速止血、封闭缺损和实时反映腹腔压力的需求。  方法  通过静电纺丝的方法制备热塑性聚氨酯弹性体(thermoplastic polyurethane，TPU)静电纺丝纳米纤维膜并组装TPU纳米纤维膜电容式压力传感器；使用生物黏合剂将电容式压力传感器与壳聚糖止血敷料组装为功能性腹壁封闭敷料；对该敷料的体外压力传感性能、力学性能、生物相容性和止血性能进行检测；通过构建动物模型对其在体内的压力传感性能进行检测。  结果  该腹壁封闭敷料弹性高于普通医用敷料；在体外测试中，其压力传感性能优异，生物相容性、止血性能良好；在腹部开放性创伤模型中，可以对动物腹内压进行实时监测。  结论  本研究通过将电容式压力传感器内嵌于壳聚糖止血敷料中，实现了对腹内压的实时监测，有望用于开放性腹部创伤的紧急救治。

• 新型细胞外基质源性神经修复材料的制备与评价

  韩锋, 魏帅, 张健, 张宇轩, 李超超, 孟繁琪, 管延军, 刘修志, 许文静, 彭江

    背景  周围神经损伤及缺损是临床常见病、多发病，长段缺损的治疗效果并不理想。  目的  探索新型细胞外基质源性神经修复材料的制备方法并评价其物理化学性质。  方法  无菌条件下提取新鲜猪坐骨神经，剔除神经外脂肪、血管等结缔组织备用。新鲜组：将剥除好的猪坐骨神经冷冻干燥，作为对照组；0.5% SDS 48 h组：将剥除好的猪坐骨神经置于浓度为0.5%的十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，SDS)溶液中，去细胞处理48 h，后冷冻干燥；0.5% SDS 48 h + scCO2组：重复0.5% SDS 48 h组制备后，将获取的神经置于超临界二氧化碳(supercritical carbon dioxide，scCO2)中行去除脂肪处理。将制备好的三组神经细胞外基质移植物分别行物理性能测定(外观和规格尺寸)、组织学观察(HE染色、Laminin/DAPI免疫荧光染色和油红O脂肪染色)、DNA含量测定和扫描电镜观察等。  结果  大体观察，处理后的神经长度稍缩短，直径稍增大，呈乳白色半透明状，大体轮廓仍完整，质地较处理前疏松；HE染色显示，0.5% SDS 48 h组和0.5% SDS 48 h + scCO2组神经均未见细胞核；Laminin(层粘连蛋白)/DAPI染色显示，0.5% SDS 48 h组和0.5% SDS 48 h + scCO2组神经内膜管状结构存在，未见细胞核；油红O脂肪染色显示，0.5% SDS 48h组脂肪未见明显减少；0.5% SDS 48 h + scCO2组脂肪明显减少；DNA含量测定显示，0.5% SDS 48h组DNA含量下降(706.7 ng/mg降至59.6 ng/mg，P ＜ 0.01)，0.5% SDS 48 h + scCO2组DNA含量下降(59.6 ng/mg降至49.2 ng/mg，P ＜ 0.05)；扫描电镜观察，0.5% SDS 48 h组和0.5% SDS 48 h + scCO2组内部可见明显的神经内膜管状结构，未见髓鞘和轴突。  结论  1)本实验制备的新型细胞外基质源性神经修复材料，清除了内部的髓鞘、轴突和脂肪等抑制神经再生的成分；同时保留了层粘连蛋白和神经内膜管状结构等促进神经再生的成分和结构。2)综合评价两组神经修复材料的物理结构和生物化学成分，0.5% SDS 48 h + scCO2组优于0.5% SDS 48 h组。

• 大麻二酚对脓毒症模型小鼠生存率和炎症反应的影响

  付泽, 李浩, 赵鹏跃, 胡时栋, 杜晓辉, 徐迎新

    背景  寻找能够治疗并缓解脓毒症症状的药物一直是临床迫切需要解决的问题。大麻二酚(cannabidiol，CBD)有希望被应用于多种神经退行性疾病和免疫相关疾病的治疗中，本课题组将目光放在大麻二酚对于脓毒症的治疗上。  目的  观察大麻二酚对脓毒症小鼠生存率、炎症细胞因子水平白细胞介素-1b(interleukin-1，IL-1b)、γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和IL-6、肺组织病理改变和免疫细胞浸润情况的影响。  方法  本试验分为两部分，共使用72只小鼠。第一部分为生存率观察实验，第二部分为标本采集实验。实验一：选取36只小鼠随机分为3组，每组12只，分别为模型对照组、大麻二酚溶剂对照组和大麻二酚实验组，盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture，CLP)后分别于12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h腹腔注射1 mL的0.9%氯化钠注射液、大麻二酚溶剂或20 mg/kg的CBD溶液。观察各组小鼠在CLP术后72 h生存率；实验二：将剩余36只小鼠按照上述方案分组，在CLP术后12 h、24 h、36 h腹腔注射1 mL的0.9%氯化钠注射液、溶剂或20 mg/kg的CBD溶液，于术后48 h处死小鼠，检测炎症细胞因子水平(IL-1b、IFN-γ、TNF-α和IL-6)、肺部病理改变和肝免疫细胞浸润情况。  结果  相较于模型组和大麻二酚溶剂对照组，大麻二酚实验组小鼠的细胞因子水平(IL-1b、 IFN-γ、TNF-α和IL-6)降低(P＜0.01)；CD4+、CD8+ T细胞、自然杀伤细胞在脓毒症小鼠肝中聚集情况明显减少，肺病理损伤改善；模型对照组、大麻二酚溶剂对照组、大麻二酚实验组小鼠72 h生存率分别为16.7%、25%、58.3%。  结论  CBD可以减轻小鼠脓毒症肺损伤，抑制炎性细胞因子的分泌，减少免疫细胞浸润，提高脓毒症小鼠的生存率。

• 探讨半夏-薏苡仁对PCPA失眠模型大鼠海马食欲素及其受体和血清细胞因子的调控作用

  王亮, 王学林, 王鹏, 李晨, 谌盈帆, 陈旸, 张印, 李绍旦, 杨明会

    背景  失眠症的发病率逐年增加，对人类身心健康造成严重危害。半夏-薏苡仁(BX-YYR)主要有效成分包括黄芩素、β-谷甾醇、豆甾醇等，但其治疗失眠症的具体作用机制尚不明确。  目的  研究BX-YYR干预对氯苯丙氨酸(4-Chloro-DL-phenylalanine，PCPA)失眠模型大鼠的食欲素(Orexin)及其受体、细胞相关因子的调控作用。  方法  采用PCPA诱导失眠大鼠模型，将实验大鼠分为6组，每组15只，分别为正常组(N)、模型组(M)、地西泮组(D)和BX-YYR低(ZL)、中(ZM)、高(ZH)剂量组，各组按10 mL/kg进行对应灌胃处理，连续7 d。进行戊巴比妥钠翻正实验和旷场实验。HE染色观察海马结构，免疫组化观察海马B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)，酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-1β (interleukin-1β，IL-1β)、IL-2、IL-6和Orexin含量，RT-PCR法检测OX1R和OX2R mRNA表达；Western blot法检测OX1R和OX2R表达。  结果  戊巴比妥钠翻正实验显示失眠模型大鼠睡眠潜伏期显著延长、睡眠持续时间显著缩短(P均＜0.01)；旷场实验中模型大鼠总活动距离减少、进入中央格距离和修饰次数增加(P均＜0.01)。HE染色显示，M组海马CA1区神经元形态和结构损伤比较严重，BX-YYR各剂量组则相对减轻。免疫组化显示，与M组比较，ZH组大鼠海马Bcl-2阳性信号面积占比升高(P＜0.01)。ELISA显示，与M组比较，D组和ZL、ZM、ZH组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-6显著降低(P均＜0.05)，D组和ZM、ZH组大鼠血清和海马Orexin水平显著降低(P均＜0.01)。RT-PCR显示，与M组比较，ZL、ZM、ZH组海马OX1R mRNA表达降低(P均＜0.05)。Western blot检测显示，与M组比较，ZL、ZM、ZH组大鼠海马OX1R表达降低(P均＜0.01)，D组和ZL组大鼠海马OX2R表达升高(P均＜0.05)。  结论  BX-YYR能够改善PCPA失眠模型大鼠的睡眠情况，同时调控血清TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6水平，其作用机制可能与调节海马Orexin、OX1R、OX2R表达，上调Bcl-2表达，从而抑制海马神经元细胞凋亡有关。

• 辐照联合表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂对中心体调节激酶(Aurora-A)高表达的非小细胞肺癌细胞系增殖的影响

  张英, 张乐天, 李素君, 王竞

    背景  Aurora-A丝/苏氨酸激酶作为维持染色体稳定的中心体调节关键激酶，在许多肿瘤中表达，并与预后不良和放射抗拒相关。放疗联合表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor，TKI)在Aurora-A高表达的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)中的作用尚不明确。  目的  探讨辐照联合EGFR-TKI对Aurora-A高表达的NSCLC细胞系的抑制作用。  方法  在A549和GLC82细胞系中筛选Aurora-A相对高表达的NSCLC细胞系，从吉非替尼(Gefitinib)和埃克替尼(Icotinib)中选择针对EGFR作用更明显的靶向药物。比较辐照联合靶向药物作用后Aurora-A及EGFR下游信号通路相关蛋白(Akt和Stat1)表达、细胞周期分布与辐照剂量之间的关系；通过流式细胞仪检测Aurora-A siRNA干预前后辐照联合靶向药物对细胞凋亡的影响；通过细胞克隆形成实验，观察辐照联合靶向药物对细胞凋亡率的影响。  结果  筛选发现GLC82细胞系是Aurora-A相对高表达的NSCLC细胞系，Icotinib对Aurora-A高表达GLC82细胞系的EGFR及其磷酸化蛋白水平抑制作用更明显。在GLC82细胞系中，与单纯Icotinib相比，Icotinib联合辐照2 Gy组的p-EGFR/EGFR、p-Aurora-A/Aurora-A、p-Akt/Akt和p-Stat1/Stat1蛋白表达水平均无统计学差异(P＞0.05)；Icotinib联合辐照10 Gy组，p-Aurora-A/Aurora-A和p-Akt/Akt表达明显下降(P＜0.05)。流式细胞术检测显示，Icotinib联合辐照后GLC82细胞周期分布呈线性改变，细胞周期阻滞在G2/M期。常规辐照(2 Gy)未显著增加GLC82细胞凋亡(P＞0.05)，Aurora-A siRNA干预后明显增加Icotinib组、辐照(2 Gy，10 Gy)组和Icotinib联合辐照10 Gy组的敏感度，促进GLC82细胞凋亡(P＜0.05)。细胞克隆实验表明，与单纯辐照相比，辐照联合Icotinib可以明显促进GLC82细胞凋亡。   结论  辐照联合Icotinib可以逆转Aurora-A引起的放射抗拒，促进GLC82细胞凋亡。