解放军医学院学报杂志

解放军医学院学报杂志2023年第5期

• 外军延时现场救护策略述评

  舒勤

  阶梯救治是军队战时卫勤保障的核心和关键。当面临偏远、严峻环境作战情况时，危重伤员的管理将成为后勤保障的难题，如何科学系统地管理院前滞留伤病员，是我军野战医疗所(队)关注的重点。延时现场救护是外军院前伤病员救护领域研究的新热点，通过对滞留危重伤病员的救护策略分析，结合复杂战术环境、当地条件资源、伤病员最大利益等充分衡量，以循证的原则作出科学的决策，必要时借助远程医疗咨询完善延时现场救护期间的决策，提升了恶劣救护条件下危重伤病员的救护结局。延时现场救护的核心策略包括伤病情监测、气道管理、转运救护、复苏、野战手术、预防低体温、感染控制、疼痛管理、伤员护理、远程医疗等。借鉴外军延时现场救护经验，及早开展适应我国实际情况的陆军战场搜救延时现场救护策略研究，有助于不断完善战时伤病员救护思路，更新救护装备器材，形成适用于我军的本土化延时现场救护的规范和指南，持续推进部队卫生人员延时现场救护能力培训，从而进一步提升我军卫勤保障能力和院前救护水平。

• 单中心真实世界数据分析：表皮生长因子受体常见和少见突变型非小细胞肺癌靶向治疗疗效比较

  王玉颖, 燕翔, 董周寰, 魏子涵, 管静芝

    背景  表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)常见突变型非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者靶向治疗疗效与少见突变患者存在差距，真实世界鲜有对两者疗效进行直接对比的研究。  目的  评估应用酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors，TKIs)靶向治疗对EGFR常见突变及少见突变患者临床预后的影响，并分析影响临床预后的因素。  方法  回顾性分析2019年8月1日 - 2021年12月31日在解放军总医院第一医学中心接受EGFR-TKIs治疗的EGFR常见、少见突变型晚期NSCLC患者临床资料，对两组患者的客观缓解率(objective response rates，ORR)、疾病控制率(disease control rates，DCR)、无进展生存期(progression-free survival，PFS)进行分析。  结果  共99例患者纳入研究，EGFR常见突变79例，少见突变20例。常见突变组ORR为63.3%，DCR为93.7%；少见突变组ORR为35.0%，DCR为65.0%；EGFR常见突变组疗效优于少见突变组(P＜0.05)。Cox回归分析提示EGFR突变类型是影响NSCLC患者PFS的独立因素(P＜0.05)，Kaplan-Meier生存分析提示常见突变与少见突变患者接受靶向治疗预后差异较大(中位PFS：13.3个月 vs 6.0个月，P=0.006)。  结论  与常见突变相比，少见突变患者靶向治疗疗效和预后均较差。

• 胰腺癌非手术患者治疗模式与预后 —— 单中心230例回顾性研究

  曹必样, 张乐天, 吴陈陈, 杨微, 刘小亮, 王倩倩, 王竞

    背景  胰腺癌非手术患者的主要治疗手段仍是以放化疗为主的综合治疗，但其最佳治疗模式及疗效尚不明确。  目的  分析接受基于放疗的综合治疗的胰腺癌非手术患者临床病理特征、治疗模式及预后。  方法  分析2016年1月 - 2020年12月解放军总医院第一医学中心放疗科收治的230例接受基于放疗的综合治疗的胰腺癌非手术患者(医学上不能手术切除或不适合手术)。Kaplan-Meier法计算中位总生存期(median overall survival，mOS)和中位无进展生存期(median progression-free survival，mPFS)。Cox风险比例模型分析影响患者生存的独立预后因素。  结果  230例患者中，男140例，女90例，中位年龄64(33 ~ 88)岁。全组患者中位随访时间19.9个月(95% CI：18.2 ~ 27.7个月)，mOS和mPFS分别为17.1个月和10.3个月，1年、2年、3年、4年和5年OS分别为68.1%、30.0%、16.0%、4.9%和2.5%。局限期(Ⅰ/Ⅱ期)、局部晚期(Ⅲ期)和转移性(Ⅳ期)胰腺癌患者mOS分别为21.1个月、17.0个月和14.1个月，mPFS分别为14.0个月、12.7个月和6.9个月。在局限期患者中，单纯放疗(radiotherapy，RT)组与放化疗联合(combined-modality therapy，CMT)组mOS无统计学差异(21.1个月 vs 19.3个月，P=0.620)；在局部晚期和转移性患者中CMT组mOS显著优于RT组(局部晚期：19.2个月 vs 11.6个月，P=0.003；转移：15.7个月 vs 8.0个月，P=0.017)。CMT组患者亚组分析显示，诱导化疗后放疗再巩固化疗(CT-RT-CT)组、化疗序贯放疗(CT-RT)组和放疗序贯化疗(RT-CT)组mOS分别为23.1个月、16.4个月、18.0个月(P=0.007)，且在局部晚期患者中mOS有统计学差异(25.5个月 vs 16.4个月和18.0个月，P=0.034)。临床分期、基线CA19-9、治疗模式和放疗部位与患者生存独立相关(P均＜0.05)。  结论  现代放化疗综合治疗背景下胰腺癌非手术患者整体生存明显改善。对于局限期患者，单纯放疗与放化疗联合的疗效相似，提示现代放疗可作为根治性治疗的可选治疗手段。对于局部晚期和转移性患者，放化疗联合仍是最佳治疗选择。不同放化疗模式影响放化疗联合治疗患者的生存，CT-RT-CT的放化疗模式可能是局部晚期患者的一种更优选择。

• 北京某地区中老年保健人群代谢相关脂肪性肝病患病情况及危险因素分析

  庄颖洁, 刘正一, 徐世平, 高利利

    背景  代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease， MAFLD)，曾用名非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease， NAFLD)，是全球广泛流行的慢性肝病。中老年保健人群作为特殊群体，其MAFLD患病率及危险因素分析尚未见报道。  目的  分析北京某地区中老年保健人群MAFLD患病情况及危险因素。  方法  以2021年1 - 12月于解放军总医院第二医学中心门诊行年度体检的中老年保健人群为研究对象，明确中老年保健人群MAFLD患病情况，并探究MALFD患病危险因素。  结果  纳入2825例中老年保健对象，平均年龄(71.62 ± 11.29)岁，男性占95.8%(2705例)。MAFLD患病率为55.5%(1569/2825)。男性患病率高于女性(56.0% vs 45.5%，P=0.031)。45 ~ 59岁、60 ~ 69岁、70 ~ 79岁和≥80岁人群的患病率分别为45.1%、58.9%、59.9%、53.0%。吸烟人群的患病率高于不吸烟人群(59.5% vs 54.7%，P=0.047)。饮酒人群的患病率高于不饮酒人群(59.3% vs 52.3%，P＜0.001)。多因素logistic回归分析显示，60 ~ 69岁、70 ~ 79岁、≥80岁人群MAFLD患病风险分别是45 ~ 59岁人群的1.953(95% CI：1.490 ~ 2.559)、2.029(95% CI：1.522 ~ 2.707)、1.722(95% CI：1.279 ~ 2.317)倍；肥胖、超重人群患MAFLD风险分别是BMI正常人群的23.131(95% CI：14.451 ~ 37.025)、6.232(95% CI：5.170 ~ 7.512)倍；高血压(OR=1.279，95% CI：1.055 ~ 1.551)、糖尿病(OR=3.053，95% CI：2.245 ~ 4.153)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)增高(OR=1.016，95% CI：1.007 ~ 1.026)、高尿酸血症(OR=1.535，95% CI：1.211 ~ 1.947)、高三酰甘油血症(OR=2.927，95% CI：2.334 ~ 3.670)、有甲状腺结节(OR=1.344，95% CI：1.077 ~ 1.677)人群发生MAFLD的风险概率均升高。ROC曲线显示，年龄、体质量指数、高血压、糖尿病、ALT、高尿酸血症、高三酰甘油血症、甲状腺结节联合应用时，ROC-AUC、敏感度、特异度、准确度分别为0.812(95% CI：0.797 ~ 0.828)、0.743、0.748、0.745，对MAFLD有较好的诊断价值。  结论  本组中老年保健对象MAFLD患病率为55.5%，年龄≥60岁、超重/肥胖、高血压、糖尿病、ALT升高、高尿酸血症、高三酰甘油血症、甲状腺结节为中老年保健人群患MAFLD的潜在危险因素。

• 糖负荷后胰岛细胞功能变化与老年男性糖尿病高危人群死亡风险的相关性分析

  刘倩倩, 胡帆, 曾静, 马丽超, 闫双通, 李春霖, 田慧, 龚燕平

    背景  我国老年糖尿病人数逐年增加，糖负荷后胰岛功能的变化与老年糖尿病高危人群预后的相关性尚不明确。  目的  探讨老年男性糖尿病高危人群胰岛素功能及其糖负荷后的变化与死亡风险的关系。  方法  选取2005年5 - 8月在解放军总医院第二医学中心因血糖异常病史行口服葡萄糖耐量试验的年龄＞60岁的老年男性人群，分别使用1 h、2 h血糖和胰岛素乘积与空腹血糖和空腹胰岛素乘积的比值评估胰岛功能变化。回顾性随访时间截至2020年12月，记录终点事件及时间，分析影响该人群15年死亡风险的危险因素，并计算2 h胰岛功能变化量对15年死亡风险的预测效能。  结果  共220例老年男性纳入研究，平均年龄(71.71 ± 7.43)岁。在15年随访中，死亡67例(78.28 ± 5.95)岁，存活153例(68.83 ± 6.06)岁。单因素Cox回归显示，年龄、舒张压、呼吸系统疾病史、三酰甘油、肌酐、谷丙转氨酶、空腹血糖、2 h血糖、2 h胰岛素、2 h胰岛功能变化量在死亡组与存活组间有统计学差异(P均＜0.05)；多因素Cox回归显示，死亡患者的年龄偏大(HR=1.185，95% CI：1.052 ~ 1.336)，舒张压偏低(HR=0.953，95% CI：0.913 ~ 0.995)，2 h胰岛功能变化量更大(HR=1.020，95% CI：1.000 ~ 1.040)。 ROC曲线分析显示2 h胰岛功能变化量预测15年死亡风险的曲线下面积(AUC)为0.682，最佳临界值为14.92。  结论  老年男性糖尿病高危人群糖负荷后2 h胰岛功能变化量是15年死亡风险的独立相关因素，大于14.92的人群死亡风险显著增加。

• 热带岛礁某二级医院常见病特征分析

  魏宏名, 张磊, 张忆汝, 朱敏, 马慧

    背景  热带岛礁特殊气候与当地常见病的发生相关，热带常见病特征的研究报道较少。  目的  回顾性分析热带岛礁某二级医院门诊就诊情况，探讨与大陆常见疾病谱的差异性，为热带岛礁常见病精准化防治提供参考。  方法  按照国际疾病分类(International Classification of Diseases，ICD)-10标准，统计分析热带岛礁某二级医院2016年1月 - 2019年12月门诊病历中62870例次诊断信息。  结果  就诊人群18 ~ 30岁年龄段占比最高(60.15%)，男性(95.83%)占比远高于女性(4.17%)。按人体系统分，排名前5位的是肌肉骨骼系统和结缔组织疾病(19.15%)、呼吸系统疾病(17.57%)、消化系统疾病(15.50%)、皮肤和皮下组织疾病(10.24%)、损伤和中毒(8.13%)。按疾病类型分，排名前5位的是上呼吸道感染(9.81%)、腰痛(5.64%)、意外事故(5.58%)、皮炎(2.96%)、陈旧性肌肉劳损(2.08%)。  结论  热带岛礁常见疾病中上呼吸道感染是主要疾病类型，病原体不明确，存在流感暴发风险，应提高检测能力，予以针对性防控；同时应提高肌肉骨骼系统疾病和皮肤、皮下组织疾病的防治。

• 晚期乳腺癌新发脑转移患者继续曲妥珠单抗治疗或更换TKI治疗的疗效和安全性比较

  陈佳欣, 张会强, 周金妹, 吴雪雪, 张少华, 江泽飞, 王涛

    背景  随着医疗水平的进步，HER2阳性晚期乳腺癌患者生存时间显著延长，但有接近50%的患者会发生中枢神经系统转移。放疗是脑转移治疗的主要手段，但放疗的剂量和次数是有限的，药物治疗已成为近年来研究重点。  目的  比较接受曲妥珠单抗治疗颅外病灶有效的脑转移患者，继续曲妥珠单抗治疗或更换小分子酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor，TKI)类药物治疗的疗效和安全性。  方法  本研究共纳入2007年5月 - 2021年12月就诊于解放军总医院第五医学中心的乳腺癌脑转移患者74例，患者既往接受曲妥珠单抗治疗有效，颅外病灶稳定，颅内病灶新发或进展，一组继续曲妥珠单抗治疗(A组)，另一组更换为TKI类药物治疗(B组)。主要研究终点为总生存期和颅内无进展生存期，次要研究终点为颅内客观反应率、颅内临床受益率和安全性。随访截至2022年4月。  结果  共纳入74例患者，其中曲妥珠单抗组38例，TKI组36例。两组患者均为女性，中位年龄分别为49.5岁和44岁，两组的中位无病生存期分别为17.0个月和16.0个月(P＞0.05)。曲妥珠单抗组和TKI组治疗脑转移患者中位颅内无进展生存期分别为9个月和8个月(P=0.400)，中位总生存分别为75个月和96个月(P=0.140)，颅内病灶临床缓解率为23.7%和41.7%(P=0.099)，颅内病灶临床获益率为63.2%和75.0%(P=0.271)。曲妥珠单抗组有34.2%(13/38)患者发生3级以上不良反应，TKI组有41.7%(15/36)患者发生3级以上不良反应，差异无统计学意义(P＞0.05)，两组均未发生治疗相关死亡事件。  结论  对于接受曲妥珠单抗治疗有效的脑转移患者， TKI类药物有延长脑转移患者总生存期的趋势，但无统计学意义。

• 基于图论的胶质瘤患者脑结构网络分析

  刘明航, 攸娜, 杨晨轩, 赵恺, 赵悦, 许百男

    背景  胶质瘤是颅内十分常见的恶性肿瘤，具有很强的侵袭性，既往研究表明胶质瘤的存在不仅会对病变周围造成损害，还会对肿瘤范围以外的其他远隔部位造成功能损害。对大脑网络的研究，可帮助临床医师对胶质瘤患者的手术预期及预后作出更精准的判断。  目的  研究不同部位胶质瘤患者脑网络拓扑属性的改变，探讨由肿瘤病变引起与大脑功能变化相关的结构网络重塑。   方法  纳入解放军总医院第一医学中心神经外科2018年1月 - 2020年12月收治的113例胶质瘤患者，采集所有受试者核磁共振扫描的弥散张量成像后，采用Mrtrix3软件对数据进行处理并构建大脑结构网络，通过GRETNA软件基于图论方法计算网络拓扑属性，观察不同位置肿瘤对脑结构网络的影响。  结果  额叶、颞叶、顶叶胶质瘤三组间的全局最短路径长度(the shortest path length，Lp)、聚类系数(clustering coefficient，Cp)、全局网络效率(network efficiency，Eg)、局部效率(local efficiency，Eloc)表现出现统计学差异，与额叶、颞叶胶质瘤组相比，顶叶胶质瘤组的全局拓扑属性表现为升高(P＜0.05)，与其他脑区节点网络属性指标相比，肿瘤所在脑区的节点介数中心性(betweenness centrality，NBc)、度中心性(degree centrality，NDc)、全局效率(nodular global efficiency，NEg)升高，节点最短路径长度(nodular shortest path length，NLp)下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。  结论  不同脑叶位置胶质瘤的网络拓扑属性发生了变化，全局属性和局部节点属性均表现出脑结构网络连接性改变。

• 皮肤镜及高频超声在银屑病指甲检查与评估中的应用

  任丹, 王婧宇, 杜治民, 王祎琳, 马冠毅, 饶玮, 赵华

    背景  指甲损害是银屑病的常见临床表现，对病甲进行精准检查和评估是临床诊疗工作的重要环节，但目前缺乏有效的检查与评估手段。  目的  探究皮肤镜和50 MHz高频超声在银屑病指甲检查和评估中的应用价值。  方法  选取2021年6月 - 2022年6月于解放军总医院第一医学中心皮肤科诊断的甲银屑病患者35例作为病例组，选取无甲相关疾病、无银屑病家族史人员25例作为对照组。应用甲银屑病严重程度指数(nail psoriasis severity index，NAPSI)评估病情，总结银屑病指甲出现的皮肤镜特征，分析不同皮肤镜特征与病情严重程度的关系。超声测量甲板、甲床的厚度并分析甲板、甲床厚度的组间差异及与病情严重程度的相关性。  结果  皮肤镜观察到银屑病指甲特征主要有远端甲分离、裂片状出血、甲凹点等。出现甲凹点、甲板脆裂、甲半月红斑、甲下角化、远端甲分离这5种特征的病损甲较无相应特征甲的NAPSI评分更高，差异有统计学意义(P均＜0.05)。超声检查可见银屑病指甲甲板三层结构显影不清晰、甲板凹凸不平、甲下角化过度，测量发现银屑病指甲的甲板、甲床厚度均较对照组增厚，除左手食指、中指、无名指外其余手指甲床厚度与NAPSI总分均呈正相关(r=0.392 ∼ 0.492，P均＜0.05)。  结论  皮肤镜可精确发现并分析银屑病指甲的病损特征，可作为银屑病指甲的常规检查手段。50 MHz高频超声可以发现银屑病甲形态结构的深层次改变，并可通过测量数据推测病情的严重程度，可用作皮肤镜检查的补充。

• 血清细胞角质素片段19在胃癌患者中的表达及对HER-2阳性的预测能力

  张旭, 南京柱, 栾小娟, 张庆

    背景  HER-2阳性的胃癌患者预后较差，且缺少与胃癌HER-2阳性相关肿瘤标志物的报道。  目的  探讨血清CYFRA21-1表达水平与HER-2阳性胃癌患者的相关性。  方法  收集2019年1月 - 2021年12月在解放军总医院手术治疗的胃癌患者165例，其中男115例，女50例，年龄29 ~ 82岁。分析HER-2基因表达阳性患者的CYFRA21-1水平，并绘制CYFRA21-1在HER-2阳性患者中表达的ROC曲线，分析其预测HER-2阳性胃癌的阈值。  结果  血清CYFRA21-1水平与胃癌的病理组织学分化程度和分型、TNM分期及肿瘤大小有关(P＜0.05）；HER-2阳性组中CYFRA21-1水平显著高于阴性组(P=0.038)；CYFRA21-1阳性表达在HER-2阳性组中的OR值为3.529(95% CI：0.967 ~ 12.878)，对HER-2阳性胃癌患者的预测百分比为70.4%，当CYFRA21-1的Cut-off值为3.62 ng/mL时，对胃癌患者HER-2阳性的预测敏感度和特异度达到最高，分别为0.552和0.833。CYFRA21-1＜3.62 ng/mL的胃癌患者1年、2年、3年生存率高于CYFRA21-1＞3.62 ng/mL者(P=0.002)，HER-2阴性胃癌患者1年、2年、3年生存率高于阳性者(P=0.044)。  结论  HER-2基因及血清CYFRA21-1水平在胃癌转移、肿瘤较大、TNM分期较晚的患者中表达升高。CYFRA21-1水平较高、HER-2阳性者生存预后较差。高血清CYFRA21-1水平对胃癌患者HER-2基因阳性表达有一定的预测价值。

• 基于E-PRE-DELIRIC风险分层模型的谵妄管理模式在重症监护病房应用的有效性及预测性能研究

  曹烨君, 张明珠, 潘国俊, 范秀丽, 祖元元, 杨剑税

    背景  谵妄是重症监护病房常见并发症，可增加死亡风险，影响预后，其防控重要性大于治疗。国内外尚未见通过风险分层模型联合优化的评估措施筛查中高风险及亚综合型谵妄并进行早期干预的报道。  目的  探讨基于E-PRE-DELIRIC早期风险分层模型的谵妄管理模式对重症监护病房(intensive care unit，ICU)患者谵妄发生率的影响，并对该风险预测模型进行效能验证研究。  方法  以常州市第四人民医院ICU病区2019年6月 - 2021年12月收治的患者为研究对象，干预组采用E-PRE-DELIRIC风险分层模型对入组患者进行风险分层，并建立基于logistic回归的多指标风险预测模型，通过ROC分析评估其预测效能。临床药师加入ICU谵妄管理团队，对中高风险患者实施重点药学监护，实施早期干预。对照组按常规谵妄管理模式执行。比较两组患者谵妄发生率、谵妄持续时间、疼痛评分、ICU住院时间和药物不良反应发生率。  结果  共纳入212例患者，干预组107例，对照组105例。两组年龄、性别、认知障碍史、酗酒史、既往病史、紧急入院、入院APACHEⅡ评分、尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、平均动脉压(mean arterial pressure，MAP)、糖皮质激素使用率和主要合并疾病等方面的差异均无统计学意义(P＞0.05)。与对照组比较，干预组谵妄发生率显著降低8.41% (9/98) vs 26.67% (28/77)，P＜0.01，疼痛评分较低Md(IQR)：0(0，0) vs 0.5(0，0.5)，ICU住院时间较短(10.21 ± 8.21) d vs (13.32 ± 9.74) d，药物不良反应发生率显著降低3.74% (4/103) vs 11.43% (12/93)，差异均有统计学意义(P ＜0.05)。以本研究样本所建风险预测模型：Log(P/1 - P)(联合虚拟指标/概率) = -1.317 + 0.018 × 年龄 + 0.712 × 认知功能障碍史 + 0.215 × 酗酒史 + 0.592 × 治疗经历 + 0.008 × 入ICU时的MAP值 + 0.416 × 呼吸衰竭 + 0.011 × 入ICU时的BUN值。ROC分析显示，7指标联合应用对ICU患者发生谵妄的风险预测效能较高，ROC-AUC (95% CI)、敏感度、特异度、准确度分别为0.882 (0.834 ~ 0.931)、0.892、0.869、0.873。  结论  基于E-PRE-DELIRIC早期风险预估分层模型的谵妄管理模式(药学监护及早期干预等措施)可降低ICU患者谵妄发生率，降低药物不良反应发生率，并能缩短患者的ICU住院时间。

• 全氟化碳雾化吸入对大鼠海水吸入性肺损伤治疗作用研究

  程志鹏, 刘金霞, 苏程程, 梁志欣

    背景  海水吸入性肺损伤是呼吸系统危重症，致死率高，目前缺乏有效治疗方法。全氟化碳(perfluorocarbon，PFC)是一种无色无味呈惰性的有机化合物，在多种急性肺损伤动物模型中表现出抗炎、抗氧化、减轻肺损伤等作用，目前无PFC雾化吸入对海水淹溺导致的急性肺损伤干预作用的研究。  目的  本研究拟探讨PFC雾化吸入对海水吸入性肺损伤的治疗作用。  方法  32只雄性SD大鼠随机分为4组，分别为0.9%氯化钠注射液组(N组)、全氟化碳雾化吸入组(P组)、海水吸入 + 0.9%氯化钠注射液吸入组(SW组)、海水吸入 + PFC雾化吸入组(SP组)，每组8只。SW组和SP组在建立海水吸入性肺损伤模型后30 min，分别经气管给予0.9%氯化钠注射液(2 mL/kg)和PFC (2 mL/kg)雾化吸入。于建模后4 h取肺组织、外周血和肺泡灌洗液，检测组织病理学、炎症指标肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素(interleukin，IL)-1β、IL-6、氧化应激指标髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、肺湿干比、肺泡灌洗液蛋白浓度，取右下肺做HE染色。另取16只雄性SD大鼠，分为4组，每组4只(各组处理方式同上)，各组于处死前30 min经右侧股静脉注射2%伊文斯蓝染料(20 mg/kg)，测定肺组织伊文斯蓝含量。  结果  与N组相比，SW组肺损伤较重，肺损伤病理评分较高(P＜0.05)，血清及肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA、MPO、肺组织湿干比、肺泡灌洗液蛋白含量及肺组织伊文斯蓝水平显著升高(P＜0.05)，SOD含量降低(P＜0.05)。海水吸入后给予PFC雾化吸入，可显著降低肺损伤病理评分、血清及肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β含量、肺泡灌洗液IL-6、血清MDA、蛋白含量、湿干比、肺组织伊文斯蓝含量(P＜0.05)，SOD含量显著升高(P＜0.05)，而血清IL-6、MPO在SW组与SP组间无统计学差异。  结论  全氟化碳雾化吸入可显著减轻大鼠海水吸入导致的肺损伤，其机制可能与改善肺内炎症反应、氧化应激和肺泡毛细血管通透性有关。

• 非梗阻性无精子症患者精浆蛋白质组学研究

  轩冉, 薛丹丹, 王春杨, 鲍金凤, 虞亚菲, 段晋燕

    背景  非梗阻性无精子症(non-obstructive azoospermia，NOA)是男性不育患者中十分严重的一种情况，目前其病理生理学机制未完全明确。  目的  应用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)定量蛋白组学技术分析非梗阻性无精子症NOA患者精浆蛋白组学，初步探索NOA相关的候选生物标志物。  方法  纳入2020年10月 - 2022年1月解放军总医院第一医学中心门诊行精液常规分析的NOA患者21例，按性激素水平分为原发性性腺功能减退(primary hypogonadism，PH)组(12例)、继发性性腺功能减退(secondary hypogonadism，SH)组(6例)和性激素水平正常组(NH组，3例)，使用Label-free质谱技术对患者精浆进行蛋白质鉴定和相对定量。采用Proteome Discoverer软件对结果进行搜库鉴定，并对差异蛋白进行生物信息学分析。  结果  在检测到的1144种蛋白质中，与性激素水平正常组相比，原发性性腺功能减退组有32个上调差异蛋白和8个下调差异蛋白，继发性性腺功能减退组有14上调差异蛋白和99个下调差异蛋白；与继发性性腺功能减退组相比，原发组有146个上调差异蛋白，21个下调差异蛋白。差异表达蛋白功能主要包括酶活性、代谢、肽链内切酶调节活性、受体结合，主要富集到溶酶体、补体和凝血级联、糖降解、氨基酸代谢等通路。蛋白质-蛋白质相互作用网络显示，苹果酸脱氢酶2 (malate dehydrogenase 2，MDH2)、肽酰-脯氨酰顺反异构酶A (peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A，PPIA)、α-胰蛋白酶间抑制剂重链H4(inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4，ITIH4)、热休克蛋白90B1 (heat shock protein 90 beta1，HSP90B1)、α-2-HS-糖蛋白(alpha-2-HS-glycoprotein，AHSG)、CD44抗原和补体C9可能在NOA患者精子生成调控网络中发挥重要作用，其中重点分析了MDH2和HSP90B1。与继发性性腺功能减退组相比，原发组MDH2下调，HSP90B1上调。  结论  本研究结果表明，MDH2、PPIA、ITIH4、HSP90B1、AHSG、CD44和C9可能在NOA患者精子生成调控网络中发挥重要作用。MDH2低表达提示睾丸功能异常致NOA，HSP90B1低表达通过调节脂质代谢影响性激素水平致NOA。差异表达蛋白的功能富集分析提示氨基酸代谢和溶酶体消化功能异常可能会引起下丘脑-垂体-性腺轴正负反馈调节紊乱；代谢途径异常、糖降解紊乱、补体和凝血级联紊乱可能会导致睾丸功能障碍。

• 云南省大姚县青石棉污染区恶性胸膜间皮瘤与致瘤性猿猴病毒SV40的关联研究

  刘如爱, 王播勇, 陈欣, 普元倩, 自加吉, 梅雯, 张也频, 邱璐, 熊伟

    背景  我国云南省楚雄彝族自治州大姚县5%地表散布蓝色青石棉，是恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma，MPM)的高发区。致瘤性猿猴病毒SV40 (simian virus 40，SV40)是一种小型环状双链DNA多瘤病毒，可使人和动物多种组织类型的正常细胞发生恶性转化并促进肿瘤生长。早年的流行病学调查显示，大姚县青石棉污染区恶性间皮瘤发病率高出一般人群几十倍，该地区MPM的发生是否与致瘤性SV40相关尚未见报道。  目的  本研究旨在探讨致瘤性猿猴病毒SV40是否与云南省大姚县青石棉污染区MPM的发生相关。  方法  收集大理大学第四附属医院(楚雄彝族自治州第一人民医院)和大姚县人民医院胸外科2014年1月 - 2019年12月诊治的51例(其中40例有石棉暴露史) MPM患者的肿瘤组织和12例非MPM患者的胸膜组织(包括肺大疱、肺结核等疾病)。同时，体外培养人正常胸膜间皮细胞LP9、Met5A (SV40转化的间皮细胞)和MPM细胞系NCI-H28 (上皮型)、NCI-H2052 (肉瘤型)、NCI-H2452 (双相混合型)。提取各组细胞和组织基因组DNA后，用3组低污染风险引物(SVINT、SVfor2和SVTA1)对SV40大T抗原(TAg) 的基因片段分别进行聚合酶链式反应(PCR)扩增检测，用两种SV40 TAg相关抗体(PAb101和PAb416)分别进行Western blotting和免疫组织化学染色，检测MPM肿瘤组织和MPM细胞系中是否存在SV40 TAg蛋白表达。  结果  PCR、Western blotting和免疫组化染色结果均显示Met5A细胞系中SV40为阳性，含有SV40 TAg基因和蛋白质。而各种MPM细胞系NCI-H28、NCI-H2052和NCI-H2452中SV40均为阴性。在12例非MPM组织和51例MPM组织中，3组低污染风险引物的PCR反应均为阴性。在12例非MPM组织和51例MPM组织中，两种抗体的免疫组化染色均未检测出SV40 TAg。  结论  云南省青石棉污染区MPM的发生与SV40病毒感染的关系可能不密切，青石棉暴露可能才是导致MPM发生的主要原因。

• 骨桥蛋白通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞自噬和增殖的机制探讨

  丁琦, 刘川川, 王泽, 周锐, 刘辉琦, 陈辛玲, 王生兰

    背景  骨桥蛋白(osteopontin，OPN)可参与低氧引起的血管重塑，使肺动脉压力升高。但OPN调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)自噬在低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension，HPH)形成中的作用机制尚不明确。  目的  探讨低氧条件下OPN对PASMCs增殖及通过PI3K/AKT/mTOR通路对PASMCs自噬的调控作用。  方法  原代分离PASMCs，采用免疫细胞化学法进行平滑肌细胞鉴定。将细胞分为常氧对照组(Normoxia)、低氧对照组(Hypoxia)、低氧 + OPN干扰空病毒组(H + OPN EV)、低氧 + OPN干扰慢病毒组(H + OPN shRNA)、低氧 + PI3K抑制剂LY294002组(H + LY)。各组分别用EdU阳性标记率法检测细胞增殖能力；Western blot法检测各组PASMCs中的OPN、PI3K、AKT、mTOR及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达；透射电镜、免疫荧光法观察各组PASMCs自噬情况。  结果  与Normoxia组相比，Hypoxia组OPN、PI3K、AKT、mTOR、Beclin1、LC3B蛋白表达量升高(P＜0.05)，细胞增殖能力增强(P＜0.05)，自噬小体数量增多，LC3B、Beclin1红色荧光强度增强(P＜0.05)。与Hypoxia组相比，H + OPN EV组各项指标无统计学差异(P＞0.05)，而H + OPN shRNA组和H + LY组OPN、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达量降低(P＜0.05)，Beclin1、LC3B蛋白表达量升高(P＜0.05)，细胞增殖能力减弱(P＜0.05)，自噬小体数量增多，LC3B、Beclin1红色荧光强度增强(P＜0.05)。  结论  在低氧条件下，OPN可促进PASMCs增殖并通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制PASMCs自噬。

• 神经生长因子对小鼠颌骨骨髓间充质干细胞增殖、迁移、分化及凋亡的影响

  王雅迪, 刘一涵, 张鹤扬, 徐振华, 刘水蓉, 江小霞, 贺慧霞

    背景  神经生长因子(nerve growth factor，NGF)是神经营养因子中的一类，能够促进中枢及外周神经元加速生长，修复损伤的神经系统，有研究证实NGF能促进中胚层来源的长骨骨髓间充质干细胞的成骨分化及骨形成，而NGF对外胚层来源的颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells，JBMMSCs)生物学特性的影响尚不明确。  目的  探讨NGF对JBMMSCs增殖、迁移、分化及凋亡特性的影响。  方法  原代培养小鼠JBMMSCs并鉴定。取第二代JBMMSCs加入含50 ng/mL NGF培养液孵育72h后，通过 CCK-8、qRT-PCR、Western blot及免疫荧光(immunofluorescence，IF)等方法检测细胞增殖及其相关标志物MCM-2、Ki67的表达；qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关标志物Bcl-3、Bax的表达；划痕实验检测JBMMSCs迁移能力；碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)染色、qRT-PCR、Western blot及IF检测成骨相关标志物表达。  结果  CCK-8结果显示，50 ng/mL NGF可显著增强JBMMSCs第3天及第5天的OD值，Western blot及IF结果显示，50 ng/mL NGF可显著增强JBMMSCs 中增殖标志物Ki67、MCM-2的蛋白水平；划痕实验结果显示，50 ng/mL NGF可显著提高JBMMSCs的迁移率，有效缩小各个时间点的划痕面积；50 ng/mL NGF可有效增强JBMMSCs的碱性磷酸酶活性，上调ALP、OCN、RUNX2、BMP2的mRNA表达水平及ALP、OCN、BMP2、OPN、RUNX2的蛋白水平；此外，50 ng/mL NGF还可上调Bcl-2的mRNA及蛋白表达水平，下调Bax的mRNA及蛋白表达水平。  结论  50 ng/mL NGF能有效提高JBMMSCs增殖、迁移及成骨分化能力，同时抑制其凋亡。

• miR-145-5p在正常大鼠与2型糖尿病大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化中的表达比较

  戴雅文, 鄂玲玲, 郑颖, 马小草, 张戎, 时权, 刘洪臣

    背景  糖尿病会导致骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs)的成骨分化能力降低， miRNA在此过程中发挥重要作用，其中miR-145-5p对细胞成骨成软骨分化有重要的调节作用。然而miR-145-5p对糖尿病源BMMSCs成骨分化的影响尚不清楚。  目的  比较正常大鼠与2型糖尿病大鼠BMMSCs成骨分化能力，初步探讨在成骨分化中miR-145-5p及其靶基因SEMA3A和Wnt通路关键蛋白β-catenin表达的差异。  方法  12只GK大鼠采用高糖高脂饲料喂养构建2型糖尿病大鼠模型，12只Wistar大鼠常规饲养作为对照组。无菌条件下分离大鼠股骨，全骨髓培养法培养正常大鼠和2型糖尿病大鼠BMMSCs (分别对应WT-BMMSCs和GK-BMMSCs)；CCK-8检测细胞增殖能力；结晶紫染色检测细胞集落形成能力；碱性磷酸酶染色及半定量分析检测碱性磷酸酶活性；茜素红染色检测矿化基质形成；qRT-PCR和Western blot检测成骨相关标志物、miRNA-145-5p、SEMA3A和β-catenin的表达。  结果  干细胞培养4 ~ 9 d时，GK-BMMSCs的增殖水平低于WT-BMMSCs，差异有统计学意义(P＜0.01)；10 d时，其集落形成率显著低于WT-BMMSCs (P＜0.01)；成骨诱导7 d时，GK-BMMSCs碱性磷酸酶活性(P＜0.001)、成骨相关标志物碱性磷酸酶基因(P＜0.01)和蛋白(P＜0.001)表达、骨钙素基因(P＜0.001)和蛋白(P＜0.001)表达均显著低于WT-BMMSCs，1型胶原蛋白(P＜0.01)基因的表达显著低于WT-BMMSCs，而Runt相关转录因子2(P＜0.001)蛋白表达显著高于WT-BMMSCs。在WT-BMMSCs成骨分化中，miR-145-5p表达下调，SEMA3A表达上调，而在GK-BMMSCs成骨分化中，miR-145-5p和SEMA3A表达均上调，β-catenin (P＜0.001)在GK-BMMSCs中的表达显著降低。成骨诱导21 d时，WT-BMMSCs矿化基质染色较深。  结论  2型糖尿病大鼠BMMSCs细胞增殖、集落形成及成骨分化能力降低，推测在正常大鼠BMMSCs成骨分化中miR-145-5p起抑制作用，在2型糖尿病大鼠BMMSCs成骨分化中miR-145-5p起促进作用。

• 负载双氯芬酸钠的间充质干细胞外泌体对类风湿关节炎小鼠治疗的研究

  王喆, 于海宽, 孟佳琦, 文山, 张传杰, 梅晰凡

    背景  类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)的临床干预措施以控制炎症为主，但一部分患者对常规治疗手段表现出低响应性，因此亟须探索新型治疗方式以满足治疗需求。  目的  探讨负载双氯芬酸钠(diclofenac sodium，DS)的间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)来源的外泌体(exosomes，EXs)对类风湿关节炎的治疗作用。  方法  从小鼠的骨髓中获取MSCs并进行体外培养，将收集的MSCs上清液通过超速离心法提取外泌体，并利用超声法将DS装载进EXs以构建纳米药物DS@EXs。通过透射电镜观察EXs和DS@EXs的形态，纳米颗粒追踪分析EXs和DS@EXs的粒径和电势，免疫印迹鉴定EXs和DS@EXs的标志蛋白CD9和CD63。通过关节冰冻切片和免疫荧光实验分析DS@EXs在小鼠体内的靶向递送能力。利用关节炎评分和炎症因子白细胞介素(interleukin，IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)水平评价DS@EXs的抗炎效果，使用micro-CT评价DS@EXs对关节的保护。  结果  透射电镜展示EXs和DS@EXs的形态均呈茶托样，DS@EXs的粒径保持在100 nm，电势保持在-12 mV，与EXs相似。另外，EXs和DS@EXs均表达CD9和CD63。与普通药物递送载体相比(如脂质体)，激光共聚焦成像可以观察到较多DIO标记的DS@EXs聚集于发炎的关节中(P＜0.05)。DS@EXs组的关节炎评分显著低于PBS组(P＜0.05)。与PBS组相比，DS@EXs组中小鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF的水平分别下降了52.8%、63.8%和52.5% (P＜0.05)。与PBS组相比，DS@EXs减弱了关节表面的骨侵蚀，其骨密度值由921 mg/cm3升高至1195 mg/cm3 (P＜0.05)。  结论  DS@EXs可以减弱类风湿关节炎小鼠的炎性反应并且缓解骨质的侵蚀。

• 鼻用糖皮质激素对大鼠鼻纤毛运动的影响评估

  易文琪, 刘晨, 徐铭鸿, 逄川, 王瑾, 董思淇, 陈雷

    背景  纤毛在气道防御机制中发挥着重要作用。由于观察技术和设备的限制，既往关于鼻用糖皮质激素对纤毛运动影响的研究主要是基于离体试验，尚无相关的在体动物研究。  目的  使用一种新的方法观察并比较鼻用糖皮质激素对在体与离体鼻黏膜纤毛运动的影响。  方法  60只大鼠随机分为在体观察组和离体观察组，每组又随机分为布地奈德、糠酸莫米松和丙酸氟替卡松3个亚组，各亚组均以磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)作为对照，每个试验组和对照组各5只大鼠。在体观察组将大鼠麻醉后立即手术暴露鼻中隔黏膜；离体观察组将大鼠过量麻醉后断头处死，取其鼻中隔黏膜放置于培养基中。两组皆放置于新型数码显微系统下观察鼻黏膜表面的纤毛运动情况，计算并比较60 min内在体与离体观察组大鼠鼻黏膜表面滴加药物前后纤毛摆动频率(ciliary beat frequency，CBF)的差异。  结果  在体观察组大鼠鼻黏膜的CBF显著高于离体观察组(9.83 ± 0.94) Hz vs (6.10 ± 0.91) Hz，P＜0.001。在体观察发现，布地奈德、糠酸莫米松和丙酸氟替卡松在60 min内对大鼠鼻黏膜CBF无显著影响；而离体观察条件下，与PBS对照组相比，布地奈德使CBF即刻下降，在60 min内组间各时间点的CBF差异均有统计学意义(P＜0.05)；糠酸莫米松使CBF持续下降，且加药5 min后各时间点的CBF差异均有统计学意义(P＜0.05)；丙酸氟替卡松使CBF波动下降，且在0 ~ 5 min和20 ~ 60 min内各时间点的CBF差异均有统计学意义(P＜0.05)。  结论  布地奈德、糠酸莫米松和丙酸氟替卡松对在体鼻黏膜的纤毛运动无显著影响，对离体鼻黏膜的纤毛运动均产生了不同程度的抑制作用，这表明鼻用糖皮质激素无显著的纤毛毒性，具有良好的安全性；同时本研究所使用的在体评估系统弥补了离体观察与机体真实环境差异较大的不足，可用于客观评价鼻用药物的安全性和纤毛毒性。

• 单克隆抗体治疗视神经脊髓炎谱系疾病的研究进展

  席宏莲, 张雯静, 郑婷, 王满侠

  视神经脊髓炎谱系疾病(neuromyelitis optic spectrum disorder，NMOSD)是一种罕见的中枢神经系统自身免疫性炎性脱髓鞘疾病，临床上多以严重的视神经炎和纵向延伸的长节段横贯性脊髓炎为主，复发率和致残率高。目前无特效药物预防其复发，近几年单克隆抗体治疗NMOSD已取得重大突破。本文基于白细胞介素-6受体、B淋巴细胞、末端补体等，针对不同免疫靶点治疗NMOSD的单克隆抗体以及AQP4-IgG阴性患者潜在的治疗靶点进行综述。