解放军医学院学报杂志

解放军医学院学报杂志2025年第11期

• CRISPR/Cas9介导的定点同源重组基因插入单质粒系统的设计和验证研究

  刘涵菲, 张硌, 刘军花, 孙刚

  背景CRISPR/Cas9系统现已成为基因编辑的核心工具，但在使用过程中仍面临长片段基因整合困难、转基因沉默等挑战。目的拟设计一种基于CRISPR/Cas9系统的环状单质粒，可在多种细胞内实现外源基因的定点插入和稳定表达。方法将Cas9、靶向特定基因位点的sgRNA及同源重组供体模板选用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)作为报告基因进行验证整合至单一环状质粒系统，使用阳离子聚合物转染法将该单质粒递送至细胞内，并通过荧光显微镜观察、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)扩增及Sanger测序进行验证。结果该单质粒系统在人类HEK293T和小鼠3T3细胞中实现了长片段基因的精准定点插入。荧光显微镜观察发现，该质粒在转染后第6天仍保持稳定GFP表达；PCR扩增和测序验证了插入位点的准确性。流式细胞分析显示，在无药物筛选条件下，293T细胞的靶向整合效率达5.3%。qPCR分析表明，插入后内源ACTB基因表达未受显著影响(变化范围0.2 ~ 1.3倍)，证实了该策略的安全性。结论本研究为长片段基因的稳定整合提供了一种简便、高效的解决方案，在工程化细胞构建、转基因体外模型构建中具有重要应用价值。

• JAK1抑制剂单药与联合PDE4抑制剂治疗中重度特应性皮炎的疗效及安全性比较研究

  黄秋晨, 于鸿妲, 杨皓瑜, 王磊, 代博文, 洪祥源, 白彦萍

  背景阿布昔替尼是首个获批上市的高选择性JAK1抑制剂，通过抑制JAK1减少炎症细胞因子产生，可有效缓解特应性皮炎(atopic dermatitis，AD)症状。现有研究表明，其联合多种外用药物疗效优于单药治疗。目的评估JAK1抑制剂单药与联合PDE4抑制剂治疗中重度AD患者的疗效和安全性。方法本研究为前瞻性、随机对照临床试验，于2023年11月至2024年3月在中日友好医院皮肤科门诊招募中重度AD患者，随机分配至联合用药组和单药组，其中联合用药组口服阿布昔替尼片(JAK1抑制剂)100 mg每日1次，并外用克立硼罗软膏(PDE4抑制剂)每日2次，单药组仅口服阿布昔替尼片100 mg每日1次。主要评价指标为在第12周时湿疹面积和严重程度指数至少改善75% (Eczema Area and Severity Index，EASI-75)和(或)研究者总体评分(Investigator's Global Assessment，IGA)为0分(完全清除)或1分(几乎清除)的患者比例。次要评价指标包括第2、4、8和12周时EASI至少改善50%/90%的患者比例，以及峰值瘙痒数值评分(Peak Pruritus Numerical Rating Scale，PP-NRS)超过或达到4分的患者比例。结果本研究入组患者50例，失访10例，40例纳入分析，其中联合用药组19例，单药组21例，两组的性别、年龄、病程差异均无统计学意义(P＞0.05)。两组在第2、4、8和12周的随访中，EASI及IGA评分均较基线有显著改善(P＜0.05)；在第12周时，联合用药组的EASI-75应答率高于单药组(84.21% vs 52.38%，P=0.039)；IGA0/1应答率高于单药组(68.42% vs 33.33%，P=0.030)；PP-NRS-4应答率高于单药组(73.68% vs 33.33%，P=0.014)。研究期间未观察到严重不良事件。结论阿布昔替尼片联合克立硼罗软膏在改善AD症状方面有显著疗效，该联合治疗方案有望成为中重度AD患者的更优治疗选择。

• 中性粒细胞-淋巴细胞比值变化、预后营养指数及炎症-营养评分对PD-1抑制剂治疗晚期非小细胞肺癌预后的评估价值研究

  陆海燕, 路中

  背景在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)免疫治疗中，PD-1/PD-L1(programmed cell death protein 1/programmed death-ligand 1)抑制剂疗效差异明显，尚无有效方法预测疗效。目的分析接受PD-1抑制剂治疗的晚期非小细胞肺癌患者中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-to-lymphocyte ratio，NLR)变化率(ΔNLR)、预后营养指数(prognostic nutritional index，PNI)及炎症-营养联合评分(inflammation-nutrition score，INS)与预后的关系。方法回顾性分析2020年1月至2024年12月在山东第二医科大学附属医院接受抗PD-L1单抗单药或联合治疗的晚期NSCLC患者的临床资料。治疗前及完成2个治疗周期后检测外周血指标，计算ΔNLR和PNI，并据此分组：ΔNLR≥20%为升高组，＜20%为稳定组；PNI≥45为营养良好组，＜45为营养不良组；INS为联合评分，ΔNLR≥20%记1分，PNI＜45记1分，2分为高风险，1分为中风险、0分为低风险。采用Kaplan-Meier法比较各组无进展生存期(progression-free survival，PFS)和总生存期(overall survival，OS)，Cox回归分析预后独立关联因素，并据此构建预后预测模型，以受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线法分析其预测效能。结果163例晚期NSCLC患者纳入分析，男100例(61.35%)，女63例(38.65%)；中位年龄61(范围：54 ~ 68)岁，中位OS16.4(IQR：11.8 ~ 22.0)个月，中位PFS为7.8(IQR：5.0 ~ 14.0)个月。NLR升高组较稳定组中位PFS显著缩短6.5(IQR：4.1 ~ 11.5)个月vs 8.6(IQR：6.2 ~ 15.9)个月，P=0.041；PNI＜45组PFS较PNI≥45组更短6.9(IQR：4.3 ~ 12.9)个月vs 8.9(IQR：6.2 ~ 17.5)个月，P=0.048；INS高风险组PFS亦较中低风险组下降6.0(IQR：4.2 ~ 9.2)个月vs 8.4(IQR：6.1 ~ 13.7)个月，P=0.047。多因素Cox回归分析显示ΔNLR升高组和PNI＜45组以及及INS高风险均与较短的PFS独立关联，而PD-L1表达≥50%者PFS相对更优(P＜0.05)。ROC分析显示，分别基于ΔNLR+PNI+PD-L1和INS+PD-L1构建的模型，对晚期NSCLC患者PFS具有较高的预测效能，AUC(95%CI)分别为0.852(0.753 ~ 0.937)和0.843(0.698 ~ 0.978)。结论治疗早期ΔNLR升高及PNI降低与NSCLC患者接受PD-L1抑制剂治疗的较差预后显著相关，INS可作为综合炎症与营养状态的分层指标，为免疫治疗疗效及预后的评估提供参考。

• 热带海岛男性作业人员消化系统疾病谱调查、风险因素分析和预测模型构建

  杜海涛, 朱海兰, 周颖, 张越, 张神, 魏宏宇, 李婷婷, 肖瑞, 杨雪, 徐世平, 李军

  背景了解热带海岛作业人员的消化系统疾病谱和发病特征，有助于寻找相关疾病的防治策略，维护作业人员身心健康，使其保持良好工作能力。目的通过对热带海岛环境作业人员进行消化系统疾病患病情况调查，分析相关风险因素，构建预测模型，探讨消化系统疾病防治策略。方法对2023年6 — 12月生活在某区域热带海岛上的作业人员采取分层整群随机抽样，对被抽样者进行问卷调查，分析岛上作业人员消化系统症状和疾病谱，探讨疾病发生的风险因素，构建预测模型并进行评估。结果发放问卷1 050份，回收有效问卷1 030份。1 030例作业人员均为男性，年龄集中在18 ~ 30岁(占90.29%)。其中512例日常有消化道症状，占比49.7%；最常见的消化系统症状是腹泻(23.8%)、便秘(15.2%)、腹胀(14.4%)、食欲不振(13.6%)、腹痛(13.3%)。251例诊断为消化系统疾病，约占24.4%，其中最常见的消化道疾病是慢性胃炎(7.8%)、急性胃炎(6.7%)、急性肠炎(5.6%)、慢性肠炎(4.2%)，功能消化不良(3.8%)。Logistic回归分析提示年龄(OR=2.50，95% CI：1.22 ~ 5.11)、家族消化病史(OR=2.48，95% CI：1.53 ~ 4.00)、平日焦虑紧张(OR=4.62，95% CI：2.00 ~ 10.69)、野外工作腹部受凉(OR=1.68，95% CI：1.03 ~ 2.75)、野外工作不洁饮食(OR=1.71，95% CI：1.10 ~ 2.67)、野外工作焦虑(OR=2.28，95% CI：1.45 ~ 3.58)，均是作业人员发生消化系统疾病的危险因素(P＜0.05)。基于此构建的Nomogram列线图预测模型，有一定的预测效能。结论热带海岛作业人员消化系统症状发生率较高。在日常消化系统疾病防治工作中，需多做防治知识宣教，并重点关注年长、有消化系统疾病家族史的人员，加强抗焦虑的心理干预，野外工作时保持饮食卫生、防止腹部着凉。

• 病毒感染通过转录与翻译后调控激活MDA5通路在抗MDA5抗体阳性皮肌炎合并间质性肺病中的作用

  刘姝孜, 赵征, 段智梅, 王凯飞, 胡晔, 谭尧, 刘铮, 谢菲

  背景抗MDA5(melanoma differentiation-associated gene 5，MDA5)抗体阳性皮肌炎(dermatomyositis，DM)容易合并间质性肺病(interstitial lung disease，ILD)，尤其是快速进展型ILD(rapidly progressive ILD，RPILD)，预后极差。目前MDA5通路异常活化的具体驱动机制尚未明确。目的探讨病毒感染是否驱动MDA5抗体阳性DM合并ILD，并阐明其是否通过转录与翻译后机制介导MDA5通路的过度活化。方法选择2023年12月至2025年1月解放军总医院第一医学中心确诊的抗MDA5抗体阳性DM患者和抗合成酶综合征(anti-synthetase syndrome，ASS)患者，比较分析两组患者的临床特征和免疫学指标。收集抗MDA5抗体阳性DM合并ILD患者的肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)，进行宏基因组测序以分析病原体分布。在体外实验中，采用人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)、单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1，HSV-1)、甲型流感病毒(influenza a virus，IAV)和人冠状病毒OC43(human coronavirus OC43，HCoV-OC43)分别感染THP-1细胞构建感染模型，运用逆转录实时定量PCR和蛋白质印迹法检测MDA5及其下游信号分子表达水平，并通过放线菌酮追踪实验评估病毒感染对MDA5蛋白稳定性的影响。结果本研究共纳入20例抗MDA5抗体阳性DM患者和10例ASS患者；与ASS组相比，抗MDA5抗体阳性DM组患者皮肤溃疡发生率(45.0% vs 0，P＜0.05)和RPILD发生率(55.0% vs 0，P＜0.01)均较高，外周血CD4⁺ T细胞(345.9±228.9 μL vs 757.6±526.7 μL)和CD8⁺ T细胞计数(154.2±119.1 μL vs 391.1±247.3 μL)较低，血清IL-6水平(14.2±10.8 pg/mL vs 4.3±4.4 pg/mL)较高，差异均有统计学意义(P均＜0.05)。15例抗MDA5抗体阳性DM患者的BALF样本宏基因组测序显示，66.7%(10/15)的抗MDA5抗体阳性DM合并ILD患者存在病毒感染，其中HCMV与HSV-1的检出率分别为46.7%(7/15)和26.7%(4/15)。体外实验表明，HCMV和HSV-1感染可促进MDA5和下游信号分子的表达；IAV和HCoV-OC43感染可在转录水平变化不显著的情况下，通过延长MDA5蛋白半衰期增强其稳定性。结论病毒感染或能通过诱导MDA5转录激活与增强蛋白稳定性，持续活化其信号通路，进而提示该病毒可能通过调控MDA5通路，参与抗MDA5抗体阳性DM合并ILD的发病。

• 干细胞来源外泌体治疗椎间盘退变的研究进展

  侯佩宏, 崔钰惠, 胡文浩, 张雪松

  外泌体是一类直径30 ~ 150 nm的细胞外囊泡，携带核酸、蛋白质、脂质等丰富的生物活性物质，在细胞间通信和物质交换过程中扮演至关重要的角色。体内外实验研究表明，干细胞来源外泌体能够以miRNA为核心调控分子，通过抑制细胞凋亡、降低炎症因子表达、维持细胞外基质稳态这三重机制延缓椎间盘退变。本文系统综述了近年来干细胞来源外泌体在椎间盘退变治疗领域的研究进展，深入剖析了其作用机制，并对当前研究面临的挑战及未来发展方向进行了探讨。

• 人工智能在经内镜逆行胰胆管造影术中的应用进展

  张贯军, 孟科, 李明阳

  以深度学习、计算机视觉等技术为核心的人工智能正在渗透经内镜逆行胰胆管造影术(endoscopic retrograde cholangiopancreatography，ERCP)的全流程：整合影像与实验室数据，精准把控手术必要性及风险分层；实时分析胆道镜或透视图像，准确识别恶性狭窄、定位壶腹、预警困难插管等，显著降低ERCP操作难度与辐射剂量；高效预测术后胰腺炎、胆管炎等并发症，实现个体化治疗。人工智能已显示出超越传统手段的诊断精度、优于经验的预测效能以及缩短学习曲线的培训优势。未来生成式对抗网络可能更为高效地合成高质量ERCP影像，为零风险训练与罕见病例数据扩增提供“数字胶片库”。

• 人工智能在烧伤外科临床应用中的研究进展

  丁亚荣, 王毅, 王俊康, 王海云

  烧伤是一种高致残率和病死率的急性创伤性疾病，传统诊断与治疗手段存在主观性强、准确率低及个性化水平不足等问题。近年来，随着人工智能(artificial intelligence，AI)技术的飞速发展，在烧伤外科领域的应用取得了显著进步。AI在烧伤临床实践中的应用主要体现在烧伤深度与面积的精准诊断、术前风险评估、术中图像引导、辅助康复治疗及术后预后预测等方面。尽管目前AI技术仍面临诸多挑战，但无疑将成为推动烧伤医学智能化进程的重要驱动力。本文综述了AI在烧伤外科临床应用的研究现状，并展望了未来发展趋势，旨在为烧伤外科学的进步提供有益参考。

• 孕期应激对子代呼吸系统影响的研究进展

  孙绪琪, 吴伟, 徐若飞, 赵坤宇, 杨甲辰, 姚雪萍

  孕期应激(prenatal stress，PS)作为一种重要的宫内逆境，对子代健康的远期影响正受到广泛关注。近年来，大量研究揭示了PS对子代发育的干扰，尤其与哮喘等疾病风险增加密切相关。然而，目前关于其具体机制尚不清晰。因此，本文聚焦于孕期应激对子代呼吸系统结构与功能的影响，系统梳理下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)轴激活、免疫失衡、Wnt信号通路异常、表观遗传修饰等潜在机制，探讨其间交互作用，旨在为早期干预提供理论依据。