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国内刊号：10-1117/R
国际刊号：2095-5227
发布日期:
作者：汪晓, 孙涛
关键词：尾侧型同源转录因子2, 慢病毒属, 载体, 骨髓间充质干细胞, 溃疡性结肠炎, 大鼠
目的 构建携带尾侧型同源转录因子2(caudal-related homeobox transcription factor 2，CDX2)的大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)，为大鼠溃疡性结肠炎模型的基因治疗提供工具。 方法 根据GenBank信息，设计CDX2引物，采用PCR扩增CDX2基因片段；通过In-Fusion技术将目的基因片段连接到线性质粒载体中，然后转化感受态细胞，进行阳性克隆筛选及基因测序。将重组载体转染293T细胞，进行慢病毒包装、浓缩及滴度测定。体外分离并培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞，流式细胞仪(fluorescence activated cell sorting，FACS)检测细胞免疫表型。将携带CDX2基因的慢病毒载体转染至大鼠骨髓间充质干细胞，利用RT-PCR及Western blot等技术检测CDX2基因及蛋白的表达水平。 结果 PCR、DNA测序及Western blot检测成功构建重组Ubi-CDX2-MCS-3FLAG-CMV-EGFP GV365慢病毒载体，测定滴度为2×108TU/ml；成功完成大鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养，FACS结果显示，大鼠BMSCs表达CD29、CD73、CD90和CD105，而不表达CD34和CD45，符合骨髓间充质干细胞的表型。成功构建携带CDX2基因的BMSCs，RT-PCR及Western blot结果显示CDX2基因转染至大鼠BMSCs并能稳定表达。 结论 本研究成功构建了携带CDX2基因的大鼠BMSCs并稳定表达CDX2，为溃疡性结肠炎基因治疗的实验性研究提供了一种新的工具。
来源：2017年第3期
《解放军医学院学报》期刊编辑部
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