解放军医学院学报

作者：邱栾, 赵珂, 董小明, 高瑞, 张飞翔, 张欣悦, 詹轶群, 李长燕, 李建雄

关键词：肝细胞生长因子受体, 原核表达, 纯化

目的 克隆人肝细胞生长因子受体(MET)基因，构建不同结构域(1-507、1-587、553-970、553-1057、1018-1390)的原核表达载体，获得其原核表达产物，并纯化相应蛋白质，为基于MET不同结构域的小分子抑制剂筛选提供依据。 方法 采用PCR技术从人肝细胞癌细胞系Hep G2 cDNA文库中扩增出人MET基因(1-507、1-587、553-970、553-1057、1018-1390)，将其克隆到pGEX-4T-2载体中，在大肠埃希菌BL21中表达后，对原核表达产物进行纯化，以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达与纯化产物。 结果 从人肝细胞癌细胞系Hep G2 cDNA文库中扩增获得分别约1 524 bp、1 764 bp、1 257 bp、1 518 bp和1 119 bp的DNA片段，并成功构建在pGEX-4T-2载体上，经测序与目的序列完全一致；在BL21中诱导表达出相对分子质量约为82 kU、91 kU、72 kU、82 kU、67 kU的目的蛋白，经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-c-MET。 结论 成功获得了MET不同结构域的重组蛋白GST-c-MET(1-507、1-587、553-970、553-1057、1018-1390)，为后续研究MET小分子抑制剂筛选奠定了实验基础。

来源：2017年第7期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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