解放军医学院学报

作者：苏星, 王安平, 郭清华, 母义明

关键词：细胞分化周期蛋白27, 神经纤维瘤病Ⅰ型基因, X染色体关联的泛素特异性蛋白酶9, 垂体柄中断综合征, 垂体特异性转录因子-1, 垂体特异性转录因子祖先蛋白

目的 进行3种全基因组外显子测序所得基因体外的功能验证，为垂体柄中断综合征病因研究的体内实验提供理论依据。 方法 将细胞分化周期蛋白27（cell division cycle protein 27，CDC27）、神经纤维瘤病1型（neurofibromatosis type 1，NF1）、X染色体关联的泛素特异性蛋白酶9（ubiquitin specific peptidase 9，X-Linked，USP9X）三种基因经由小干扰RNA （siRNA）分别转染至细胞内，每种基因均设置实验组、阴性对照（negative control，NC）组、空白细胞组。通过RTPCR筛选出各基因最佳的siRNA敲低序列以用于复筛，Western bolt复筛各基因最佳敲低序列在蛋白水平的表达，以确定目标基因进行下一步研究。依次运用CCK-8检测细胞增殖能力及形态，细胞划痕实验检测细胞迁移，酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测细胞分泌功能，Western bolt检测垂体特异性转录因子-1（pit-oct-unc class 1 homeobox 1，POU1F1）和垂体特异性转录因子祖先蛋白（homeobox protein prophet of pit-1，PROP1）表达水平。 结果 1） CDC27在siRNA 117和1968序列时能够达到稳定的沉默效率，并且在mRNA及蛋白两个水平上均能够被敲低，NF1和UPS9X仅能在mRNA水平上实现敲低而未实现蛋白水平的敲低，无法进行后续实验；2） CDC27沉默对于细胞的增殖及形态无明显影响（P> 0.05）；3） CDC27沉默能够明显抑制细胞的迁移能力（PP均P> 0.05）；5） CDC27沉默能够明显下调POU1F1与PROP1的表达水平（P结论 CDC27沉默可以抑制GH3细胞的迁移及其生长激素、泌乳素的分泌。

来源：2018年第4期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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