解放军医学院学报

作者：陈志达, 张鹏飞, 郗洪庆, 戴广海, 卫勃, 陈凛

关键词：HDAC6去乙酰化酶, GST-HDAC6融合蛋白, 组蛋白

目的 通过获得纯化有活性功能的GST-HDAC6融合蛋白，为去乙酰化酶调控肿瘤的发生发展机制提供实验基础。 方法 采用PCR技术从人乳腺文库中扩增出人组蛋白去乙酰化酶HDAC6全长编码区基因序列，将其正确插入到pGEXKG载体中，重组质粒在大肠埃希菌DH5α中转化表达后，利用GST-Sepharose 4B亲和株对融合蛋白进行纯化，以SDSPAGE和Western blot鉴定表达与纯化产物，最后通过去乙酰化实验检测融合蛋白的生物活性。 结果 从人乳腺文库中扩增获得约3 645 bp的DNA片段，并成功克隆至pGEX-KG载体上，经测序与目的序列完全一致；在DH5α大肠埃希菌中诱导表达出相对分子质量(Mr)约为170 000的目的蛋白，经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白GST-HDAC6，去乙酰化酶实验证明该蛋白活性良好。 结论 成功获得了活性良好的重组蛋白GST-HDAC6，为后续研究乙酰化修饰与肿瘤之间的关系奠定了实验基础。

来源：2018年第12期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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