解放军医学院学报

作者：刘奇, 赵洪强, 姚人骐, 姚咏明, 李为民

关键词：脓毒症, 乳酸, 免疫功能, 树突状细胞, 自噬

  背景  树突状细胞(dendritic cell，DC)功能障碍是脓毒症发生发展的重要原因之一。乳酸作为无氧糖酵解重要中间代谢产物，对多种免疫细胞包括DC具有明显的抑制效应。  目的  探讨脓毒症小鼠高乳酸血症对DC功能的影响及作用机制。  方法  C57BL/6小鼠随机分为假伤组及脓毒症组。采用盲肠结扎穿孔术构建小鼠脓毒症模型，通过血气分析仪检测小鼠外周血乳酸浓度。抗小鼠CD11c+免疫磁珠分离脾树突状细胞，流式细胞仪检测DC表面分子CD80、CD86及主要组织相容性复合体-Ⅱ(major histocompatibility complex-Ⅱ，MHC-Ⅱ)表达，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)、IL-4、IL-12及γ干扰素(interferon-γ，IFN-γ)细胞因子表达；激光共聚焦显微镜观察自噬体的形成及数量。  结果  脓毒症组小鼠外周血乳酸浓度较假伤组明显升高，且在术后24 h及48 h较为显著24 h：(2.61±0.54) mmol/L vs (1.43±0.58) mmol/L，P＜0.01；48 h：(2.12±0.51) mmol/L vs (1.32±0.53) mmol/L，P＜0.01。脓毒症组小鼠DC表面分子CD80及MHC-Ⅱ表达在24 h时较假伤组明显升高(CD80：61.40% ± 9.20% vs 7.94%±1.01%，P＜0.05；MHC-Ⅱ：79.91%±8.32% vs 30.34%±2.47%，P＜0.05)，并能有效刺激T细胞IFN-γ分泌，诱导T细胞向Th1极化，而脓毒症组小鼠48 h时DC功能出现明显抑制，并诱导T细胞向Th2极化(IFN-γ/IL-4：0.41±0.06 vs 1.00±0.00，P＜0.01)。乳酸体外刺激可显著抑制DC功能，导致其表面分子表达及刺激T细胞分泌能力显著下调脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)组vs 乳酸组。CD80：5.11%±0.52% vs 0.09%±0.02%，P＜0.01；MHC-Ⅱ：96.89%±0.16% vs 95.96%±0.20%，P＜0.05；CD86：67.26%±1.23% vs 32.45%±2.95%，P＜0.01；IL-2：(3.12±1.25) pg/mL vs (0.44±0.14) pg/mL，P＜0.05，LPS联合乳酸刺激DC呈现出相同的趋势，且与乳酸组差异无统计学意义(P＞0.05)。脓毒症暴露和乳酸刺激均可诱导DC自噬过度活化，分别予以3-MA及Bafilomycin干预自噬均可有效逆转乳酸对DC功能的抑制效应。  结论  脓毒症小鼠高乳酸血症可能是DC功能紊乱的重要原因，乳酸可通过诱导过度细胞自噬的方式介导DC应答障碍。

来源：2021年第4期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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