解放军医学院学报

作者：葛祥伟, 张德宇, 翟今朝, 卢迪, 叶棋浓, 汪进良

关键词：人HPIP基因, 真核表达, Flag标签, 肺癌细胞, 增殖

  背景   人造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白(hematopoietic pre-B cell leukemia transcription factor interacting protein，HPIP)参与多种肿瘤的发生发展过程，其在肺癌中的机制仍有待研究。  目的  构建带有Flag标签的HPIP真核表达载体，表达pcDNA3.0-Flag-HPIP融合蛋白，检测其对肺癌细胞增殖、迁移等生物学功能的影响。  方法   利用人乳腺文库作为模板，PCR技术扩增HPIP基因的编码序列，将其酶切产物连接到pcDNA3.0-Flag载体并测序。将重组质粒转染至A549肺癌细胞系中，Western blot验证转染后HPIP的蛋白表达情况。采用克隆形成实验、CCK-8法及细胞划痕实验等明确其对肺癌细胞增殖、迁移等功能的影响。  结果   PCR扩增得长度为2 109 bp的HPIP基因编码序列，并成功插入至pcDNA3.0-Flag载体中。测序和Western blot验证融合蛋白构建成功。CCK-8法和克隆形成实验表明，与对照组相比，转染Flag-HPIP后肺癌A549细胞增殖能力显著增强。划痕实验证实转染Flag-HPIP后可明显提高肺癌A549细胞的迁移能力。  结论   本实验成功构建了带有Flag标签的HPIP基因真核表达载体，并证实其能够促进肺癌细胞的增殖和迁移，为后续HPIP在肺癌中的功能研究奠定了良好基础。

来源：2021年第12期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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