解放军医学院学报

作者：黄萌, 江小霞, 崔建通, 赵长铭, 王振宁, 张宇, 吴丽丽, 孙兆峰, 徐璐璐

关键词：破骨细胞, 微RNA, miR-134-5p, 整合素β1, 骨改建

  背景  微RNA(microRNA)是一种内源性非编码RNA，在生命活动的各个方面都拥有不可忽视的地位，尤其在骨改建中发挥着重要作用。其中，miR-134-5p及其靶基因整合素β1(integrin β1，Itgb1)在破骨细胞中发挥的相互作用尚未见报道。  目的  研究miR-134-5p靶向Itgb1对小鼠破骨细胞形成的影响。  方法  诱导小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages，BMMs)分化为破骨细胞，用TRAP染色观察破骨细胞形态，并通过qRT-PCR检测BMMs向破骨细胞分化的过程中破骨相关基因TRAP、CTSK、NFATc1以及miR-134-5p的表达水平变化。实验分为过表达miR-134-5p组(agomir)、敲低miR-134-5p组(antagomir)及其相应对照组(agomir NC和antagomir NC)，将其分别转染入BMMs中，qRT-PCR检测转染效率后，对各组进行破骨细胞TRAP染色和肌动蛋白环(F-actin)染色观察细胞形态，同时检测破骨相关基因TRAP、CTSK、NFATc1的表达水平；通过生物信息学网站筛选出miR-134-5p可能的靶基因Itgb1，qRT-PCR和Western blot检测Itgb1基因表达。  结果  与诱导1 d后的BMMs细胞相比，BMMs诱导分化7 d后TRAP染色阳性的破骨细胞形成增多，破骨相关基因TRAP、CTSK、NFATc1表达水平升高(P＜0.01)，同时qRT-PCR检测结果提示miR-134-5p表达水平降低(P＜0.01)；转染agomir后BMMs在体外向破骨细胞的分化受到抑制，TRAP染色阳性的破骨细胞数目减少，荧光下肌动蛋白环数目也减少，且TRAP、CTSK、NFATc1基因表达水平降低(P＜0.01)；而转染antagomir后促进BMMs细胞向破骨细胞分化表现为TRAP染色阳性的破骨细胞数目增加，肌动蛋白环数目同样增加，且TRAP、CTSK、NFATc1基因表达水平升高(P＜0.01)。通过生物信息学网站筛选，miR-134-5p与Itgb1基因在其3-UTR端存在结合位点，qRT-PCR和Western blot检测均显示上调miR-134-5p时Itgb1表达降低。  结论  miR-134-5p通过靶向Itgb1在破骨细胞形成中发挥抑制作用。

来源：2022年第1期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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