解放军医学院学报

作者：徐凯, 尹凤娇, 张耀刚, 吴传玲, 李文登, 任利, 樊海宁, 王海久, 王志鑫

关键词：多房棘球蚴, 囊液, 小鼠肝细胞, 细胞凋亡, 细胞自噬

  背景  多房棘球蚴病是一种流行于北半球的人兽共患寄生虫病，由于不能形成完整的“囊壁”，其病灶中的囊液持续外渗，不断刺激宿主肝细胞，使肝细胞出现“丢失”的情况。   目的  初步探究多房棘球蚴囊液(hydatid cyst fluid，HCF)对小鼠肝AML-12细胞凋亡与自噬的影响。  方法  CCK-8法筛选合适的HCF浓度后，将小鼠AML-12细胞分为对照组、HCF 0.4 mg/mL组和HCF 0.8 mg/mL组。CCK-8法检测各组小鼠肝AML-12细胞活性(浓度选择)；流式细胞术检测小鼠肝AML-12细胞凋亡情况；Western blot法检测DDIT4、Beclin-1、Caspase-3、PCNA、LC3等凋亡自噬相关蛋白的表达情况；单丹磺酰尸胺(monodansyl cadaverine，MDC)法检测细胞自噬的情况，透射电镜下观察HCF对小鼠肝AML-12细胞超微结构的影响。  结果  CCK-8结果显示24 h、48 h、72 h时0.8 mg/mL、1.6 mg/mL、3.2 mg/mL、6.4 mg/mL HCF组和48 h、72 h时0.4 mg/mL HCF组的AML-12细胞增殖抑制率均较对照组明显升高(P＜0.01)；流式细胞计数检测结果显示0.4 mg/mL、0.8 mg/mL HCF作用于细胞48 h后细胞凋亡率明显升高(P＜0.01)；MDC法结果显示0.4 mg/mL、0.8 mg/mL HCF作用于细胞48 h后出现大量高亮度类圆形团块，平均荧光强度明显升高(P＜0.01)；Western blot法检测结果显示，与对照组相比，0.4 mg/mL、0.8 mg/mL HCF组DDIT4、PCNA、Caspase-3、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(P＜0.01)；与0.4 mg/mL HCF组相比，0.8 mg/mL HCF组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达显著升高(P＜0.05)。透射电镜下可见对照组细胞质未见明显肿胀，线粒体基质较均匀，嵴少量减少，自噬水平低；0.4 mg/mL HCF组线粒体损伤程度较低，轻微肿胀，嵴少量断裂，胞内可见较多自噬溶酶体；0.8 mg/mL HCF组细胞线粒体损伤程度高，线粒体膜破损、基质外溢，嵴缺失，胞内可见较大面积自噬溶酶体。  结论  HCF对体外培养的AML-12细胞的增殖有明显抑制作用，DDIT4表达增高，并促进AML-12细胞自噬的发生，诱导细胞凋亡。

来源：2022年第1期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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