解放军医学院学报

作者：刘雅婷, 马天驹, 叶子, 李朝辉

关键词：穿膜肽, 血红素氧合酶1, 抗氧化应激, 人晶状体上皮细胞, 细胞凋亡

  背景  细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides，CPPs)是一类具有细胞膜穿透能力的多肽，可以作为药物载体携带大分子物质进入细胞，其因低毒性和多组织普适性广泛运用于医学成像和治疗的研究中。  目的  构建穿膜肽钴原卟啉药物复合体(R6-CoPP)，研究其生物相容性和减轻晶状体上皮细胞氧化应激损伤的作用。  方法  采用Fmoc固相合成法，根据设计的序列合成寡聚精氨酸穿膜肽(R6)，以脱水缩合法将其与钴原卟啉(cobalt protoporphyrin，CoPP)连接，使用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate，FITC)进行标记。应用高效液相色谱仪和质谱仪测定其纯度和相对分子质量，利用扫描透射电镜(STEM)能谱面/线扫和激光纳米粒度电位测量仪观测其表征形貌、元素分布、粒子直径和表面电位；细胞流式仪和共聚焦显微镜观察R6-CoPP对体外培养的人晶状体上皮细胞系的穿膜效果；CCK-8法检测R6-CoPP对人晶状体上皮细胞系细胞活性的影响。利用H2O2构建晶状体上皮细胞氧化损伤模型，比较R6-CoPP与CoPP预处理对细胞凋亡的影响。   结果  经高效液相色谱法鉴定R6-CoPP纯度为94.56%，质谱鉴定相对分子质量为2109.75，与预计相符，粒径为227.8 nm，表面电位为 + 13.9 mV，STEM能谱面扫显示R6-CoPP内有钴元素分布。R6-CoPP对细胞毒性较小，生物相容性好。细胞流式结果显示穿膜肽药物孵育细胞2 h后荧光阳性细胞比例可达80%以上。共聚焦显微镜荧光显示孵育15 min后R6-CoPP已经穿越细胞膜进入细胞质，细胞荧光强度随孵育时间的增加而下降。与氧化损伤模型组相比，CoPP和R6-CoPP预处理后的细胞存活率明显提高(P＜0.05)。  结论  穿膜肽药物复合体R6-CoPP生物相容性较好，具有较强的细胞膜穿透能力，体外实验显示其可减轻氧化损伤所致的晶状体上皮细胞凋亡。

来源：2022年第6期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

查看解放军医学院学报杂志2022年第6期