解放军医学院学报

作者：王超臣, 荆瑞, 杨文山, 王一晨, 李夏, 王元博, 姚磊, 胡园

关键词：极低密度脂蛋白, 内皮损伤, 体外细胞模型, 血脂, 改良沉淀浓缩法

  背景  极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein，VLDL)是动脉粥样硬化的危险因素，由三酰甘油、胆固醇和多种载脂蛋白(apolipoprotein，Apo)构成。由于载脂蛋白分离难度较大，鲜有研究关注VLDL中所含多种载脂蛋白共同作用对动脉粥样硬化的影响。  目的  使用改良沉淀浓缩法纯化脱脂极低密度脂蛋白(apolipoprotein very low density lipoprotein，ApoVLDL)并评估ApoVLDL对EA.hy926内皮细胞的损伤作用和黏附功能的影响。  方法  使用沉淀法去除血清中的低密度脂蛋白，然后依次经超滤浓缩离心管浓缩和密度梯度离心分离得到VLDL，最后脱脂得到ApoVLDL，分别使用不同浓度(0 μg/mL，50 μg/mL，100 μg/mL，200 μg/mL)的ApoVLDL对EA.hy926内皮细胞进行孵育，以评估ApoVLDL对EA.hy926内皮细胞活力和黏附功能的影响。  结果  ApoVLDL可以通过改良沉淀浓缩法得到，ApoVLDL粒径为(141.3 ± 0.64) nm，多分散性指数(polydispersity index，PDI)为0.27 ± 0.0076，Zeta电势大小为(-18.73 ± 0.58) mV，颗粒大小均匀，分散系较稳定。使用ApoVLDL孵育EA.hy926内皮细胞24 h后，细胞活力降低明显，呈浓度依赖趋势(P＜0.0001)。当ApoVLDL浓度为100 μg/mL时，相比对照组，EA.hy926内皮细胞24 h划痕闭合率明显变小(11.10% ± 0.693% vs 50.57% ± 2.66%，P＜0.001)，提示EA.hy926内皮细胞迁移能力受到明显抑制；同时，EA.hy926内皮细胞黏附的白细胞数明显增加(22.13 ± 1.04 vs 7.25 ± 1.58，P＜0.01)，且EA.hy926内皮细胞VCAM-1 mRNA的表达显著增加(P＜0.01)。  结论  使用改良沉淀浓缩法可以有效制备ApoVLDL。使用ApoVLDL诱导的EA.hy926内皮细胞功能障碍，可为Apo C-Ⅲ诱导内皮功能障碍研究提供一种特异性体外细胞损伤模型。

来源：2023年第2期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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