解放军医学院学报

作者：陈镜伊, 赵玲萍, 刘雯丽, 习佳飞, 梁志欣

关键词：Miro1蛋白, 慢病毒载体, 间充质干细胞, 线粒体, 细胞接触依赖性转移

  背景  线粒体转移是干细胞发挥免疫修复功能的重要机制之一，Miro1是线粒体转移过程的关键蛋白，但其动力学研究欠缺研究模型。  目的  构建过表达Miro1的间充质干细胞稳转细胞株，为线粒体动力学研究间充质干细胞的抗炎修复机制提供细胞模型。  方法  通过PCR扩增目的基因后进行Gibson反应、转化及Gateway等方法构建载体，并对载体进行酶切鉴定。慢病毒感染间充质干细胞后，使用嘌呤霉素进行药物筛选获得稳转细胞株。后续分为三组进行相关鉴定。(1) BMSC组：正常间充质干细胞；(2) Con-BMSC组：慢病毒空载体感染的间充质干细胞；(3) MiroHi-BMSC组：过表达Miro1的慢病毒载体感染的间充质干细胞。通过RT-qPCR、Western blot检测上述三组细胞Miro1的表达水平，并进行划痕试验、水平迁移实验、成骨及成脂诱导分化以鉴定干细胞特性。  结果  所构建的载体完成酶切鉴定，并成功获得过表达Miro1重组慢病毒载体pLV-EGFP:T2A:Puro-EF1A＞mRhot1/HA。经mRNA和蛋白水平检测，MiroHi-BMSC组的Miro1表达高于BMSC组和Con-BMSC组(P＜0.05)，干细胞水平、垂直迁移能力三组间差异无统计学意义(P＞0.05)，三组干细胞均可成功进行成脂及成骨诱导分化。  结论  通过慢病毒载体成功构建Miro1Hi-BMSCs稳转细胞株，且该稳转株仍保留干细胞特性，可用于间充质干细胞调控线粒体转移的相关研究。

来源：2023年第4期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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