解放军医学院学报

作者：丁琦, 刘川川, 王泽, 周锐, 刘辉琦, 陈辛玲, 王生兰

关键词：低氧, 骨桥蛋白, 细胞自噬, 细胞增殖, PI3K/AKT/mTOR信号通路

  背景  骨桥蛋白(osteopontin，OPN)可参与低氧引起的血管重塑，使肺动脉压力升高。但OPN调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells，PASMCs)自噬在低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension，HPH)形成中的作用机制尚不明确。  目的  探讨低氧条件下OPN对PASMCs增殖及通过PI3K/AKT/mTOR通路对PASMCs自噬的调控作用。  方法  原代分离PASMCs，采用免疫细胞化学法进行平滑肌细胞鉴定。将细胞分为常氧对照组(Normoxia)、低氧对照组(Hypoxia)、低氧 + OPN干扰空病毒组(H + OPN EV)、低氧 + OPN干扰慢病毒组(H + OPN shRNA)、低氧 + PI3K抑制剂LY294002组(H + LY)。各组分别用EdU阳性标记率法检测细胞增殖能力；Western blot法检测各组PASMCs中的OPN、PI3K、AKT、mTOR及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达；透射电镜、免疫荧光法观察各组PASMCs自噬情况。  结果  与Normoxia组相比，Hypoxia组OPN、PI3K、AKT、mTOR、Beclin1、LC3B蛋白表达量升高(P＜0.05)，细胞增殖能力增强(P＜0.05)，自噬小体数量增多，LC3B、Beclin1红色荧光强度增强(P＜0.05)。与Hypoxia组相比，H + OPN EV组各项指标无统计学差异(P＞0.05)，而H + OPN shRNA组和H + LY组OPN、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达量降低(P＜0.05)，Beclin1、LC3B蛋白表达量升高(P＜0.05)，细胞增殖能力减弱(P＜0.05)，自噬小体数量增多，LC3B、Beclin1红色荧光强度增强(P＜0.05)。  结论  在低氧条件下，OPN可促进PASMCs增殖并通过PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制PASMCs自噬。

来源：2023年第5期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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