解放军医学院学报

作者：梁钰英, 陈水平

关键词：乙型肝炎病毒, 质谱分析法, 基因型, 病毒耐药性, 聚合酶基因, 高通量筛选试验, 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

背景HBV耐药突变检测是临床精准治疗的关键环节，虽然目前检测方法较多，但均不适于临床大规模应用。目的基于Sequenom MassARRAY SNP技术，建立检测HBV聚合酶基因型耐药突变的质谱检测平台。方法随机选取解放军总医院第五医学中心2014年3月— 2018年6月100例HBV核酸阳性患者进行聚合酶基因的全长序列测定，其中男51例，女49例，中位年龄51岁。采用MEGA11.0进行序列比对及聚类分析，分析测序成功的62例HBV聚合酶基因的序列特征和基因型，并人工合成野生型和突变型聚合酶基因序列，设计针对HBV主要耐药相关SNP位点(19个)的延伸扩增引物及单碱基延伸引物，建立相应的耐药突变质谱数据库，评估各耐药突变的检出限。从聚合酶区测序成功的62例临床血清样本中随机选取18例，利用sanger测序法和Sequenom MassARRAY SNP法对聚合酶区的耐药突变进行检测。结果基于聚合酶基因的进化树显示，在62例临床HBV核酸阳性标本中，基因B型和基因C型分别占25.8%和74.2%。设计并合成1条野生型聚合酶基因序列和5条突变型序列，共覆盖基因B型和基因C型的15个耐药突变(包含19个SNP位点)。所建立的质谱检测平台经优化后，对19个SNP位点的检出限均在1% ~ 5%。在18例临床样本中，Sanger测序法均未检出HBV耐药SNP位点，但Sequenom MassARRAY SNP检出5例样本含HBV耐药SNP位点，其中4例基因B型，1例基因C型。结论本研究建立了基于Sequenom MassARRAY SNP技术的HBV耐药突变的质谱检测平台，初步应用显示了该平台具有快速精准、高通量、高灵敏等特点，一次实验可确定HBV的耐药特征，具有良好的临床应用前景。

来源：2025年第10期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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