解放军医学院学报

作者：宫晓静, 祖潇然, 景志强, 张俊雅, 徐亦驰, 韩岩

关键词：脂肪间充质干细胞, 细胞凋亡, 凋亡囊泡, 中性粒细胞胞外诱捕网, 中性粒细胞炎性坏死

背景间充质干细胞来源凋亡囊泡(mesenchymal stem cells-apoptotic vesicles，MSCs-apoVs)具有减少多形核中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils，PMNs)发生中性粒细胞炎性坏死(neutrophilic inflammatory necrosis，NETosis)，抑制中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps，NETs)生成，促进PMNs凋亡的作用。这使得MSCs-apoVs成为当前治疗NETosis相关免疫疾病的新策略。目的探讨人脂肪间充质干细胞来源的凋亡囊泡(adipose-derived stem cell-apoptotic vesicles，ADSCs-apoVs)抑制NETosis的机制并促进其凋亡的作用程度。方法原代分离、培养并鉴定ADSCs，采用高速离心法提取并鉴定由星孢菌素(Staurosporine，STS)诱导凋亡的ADSCs-apoVs。利用差速离心法结合流式无菌分选技术分离提取小鼠骨髓原代PMNs，将PMNs与不同浓度(1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL)ADSCs-apoVs共培养8 h，通过免疫荧光及流式检测不同浓度(1 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL)的ADSCs-apoVs作用后PMNs的NETs生成量，NETosis及凋亡变化。结果ADSCs-apoVs通过浓度依赖的双重机制调控PMNs死亡。NETosis抑制显示，5 μg/mL组ADSCs-apoVs与对照组比，能显著抑制H3cit生成量(48.20 ± 0.96 vs 75.30 ± 1.00，P＜0.001)，同时能显著抑制NETosis的发生(NETosis率：36.07% ± 3.07% vs 57.03% ± 5.35%，P=0.002)；10 μg/mL组协同抑制瓜氨酸化组蛋白(citrullinated histone H3，H3cit)生成(24.73 ± 0.90 vs 75.30 ± 1.00，P＜0.001)并降低NETosis率(16.48% ± 8.09% vs 57.03% ± 5.35%，P＜0.001)。凋亡阈值效应显示，10 μg/mL组与对照组相比能显著促进PMNs发生凋亡(50.70% ± 10.86% vs 10.30% ± 1.55%，P=0.001)，并显著促进早期凋亡(14.30% ± 1.97% vs 0.25% ± 0.21%，P＜0.001)及显著促进晚期凋亡(36.40% ± 12.75% vs 10.06% ± 1.40%，P=0.011)，而1、5 μg/mL组ADSCs-apoVs的PMNs凋亡率无显著变化(9.14%±4.82% vs 10.30%±1.55%，P=0.997)，(10.26% ± 7.31% vs 10.30% ± 1.55%，P＞0.999)。结论ADSCs-apoVs通过双重途径调控PMNs命运，一是抑制H3cit以抑制NETs的形成进而阻止PMNs发生NETosis；二是激活凋亡通路，促进PMNs大量凋亡。5 μg/mL ADSCs-apoVs是NETosis特异性抑制安全窗浓度，而10 μg/mL ADSCs-apoVs是NETosis抑制协同凋亡激活的有效清除剂量。

来源：2025年第10期

《解放军医学院学报》期刊编辑部

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